Zaman Çözümlü Floresan Görüntüleme için İşlevselleştirilmiş Manyetik Nanopartiküllerin Hazırlanması

Başlamak için, TNF alfa, interlökin-1 beta ve interlökin-6 tespiti için tüplere streptavidin işlevselleştirilmiş nanopartiküller ekleyin. Streptavidin artı nanopartikülleri eşit hacimlerde PBS ile seyreltin. Daha sonra, biyotinile edilmiş yakalama antikor çözeltilerini tüplere ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin.

Daha sonra, her tüpe 1 milimolar D-Biotin çözeltisinin% 0.01'ini ekleyin ve beş dakika inkübe edin. Ardından, parçacıkları toplamak için tüpe yakın bir neodimyum mıknatıs tutun. Berrak süpernatanı atın ve nanopartikülleri Pluronic F-127 ve PBS karışımında hemen yeniden süspanse edin ve 30 dakika inkübe edin.

Parçacıkları depolama tamponunda 30 dakika inkübe ettikten sonra, homojen bir karışım elde etmek için karıştırın. Kapsüllemeden hemen önce, konjuge nanopartikülleri interlökin-6, TNF alfa ve interlökin-1 beta için birleştirin. Şimdi, parçacıkları daha önce gösterildiği gibi mıknatısı kullanarak tam ortamla yıkayın ve boncukları tam ortamda yeniden süspanse edin.

Daha sonra, 10 nanomolar nihai konsantrasyonu elde etmek için interlökin-6, TNF alfa ve interlökin-1 beta için tespit antikorları ekleyin.