Telomer uzunluğu ölçümü için MM QPCR testini gerçekleştirerek başlayın. Ardından yazılımı açın ve plaka kurulum özelliğini seçin. Bundan sonra, açılır menüden plakayı görüntüle veya düzenle seçeneğini seçin.
Şimdi plakadaki tüm kuyuları vurgulayın. Floraforları seç'i tıklayın. Siber etiketli kutuyu işaretleyin ve diğer tüm kutuların işaretli olmadığından emin olun.
Ardından onaylamak için Tamam'ı tıklayın. Tüm kuyularda vurguyu korurken, tüm kuyuları siber ile etiketlemek için yük kelimesinin yanındaki siber'in yanındaki kutuyu bulun ve işaretleyin. Şimdi, standart kontrol seri seyreltmesinin üstünde veya altında konumlandırılmış üç şablon olmayan kontrol kuyusunu vurgulayın.
Ardından sağdaki örnek türü menüsünden NTC'yi seçin. Standart kontrol seri seyreltmesini oluşturan 21 kuyuyu vurgulayın ve numune tipi menüsünden standart'ı seçin. Bu kuyular hala seçiliyken, teknik çoğaltmaya tıklayın, çoğaltma boyutu menüsünde üç tane seçin.
Ardından yatay'ı seçin ve uygula'yı tıklayın. Bundan sonra, seyreltme serisi bölümüne ilerleyin ve seyreltme faktörü alanına iki tane girin. P1 plakası için, başlangıç konsantrasyon alanında iki kez 10 üzeri eksi üçün kuvvetini girin.
Ardından azaltmak için kutuyu seçin ve ayarları onaylamak için uygula'yı tıklayın. P2 plakası için, başlangıç konsantrasyon alanına 3.13 çarpı 10 üzeri eksi beş girin. Artırmak için kutuyu işaretlediğinizden emin olun ve ardından kurulumu sonlandırmak için uygula'yı seçin.
Şimdi numune türü menüsünden PCR şeridi A'ya karşılık gelen sütunları vurgulayın, bilinmeyen'i seçin, ardından teknik çoğaltmayı seçmeye devam edin. Çoğaltma boyutu menüsünde, üçünü seçin ve uygula'yı tıklamadan önce yatay'ı seçin. Plaka düzenleyici penceresinin sağ alt kısmındaki Tamam'a tıklayın.
İstendiğinde evet'e tıklayarak değişiklikleri onaylayın. Ardından, niceleme sekmesindeki eğrilerin hem dokuzuncu adım hem de adım 12 için uygun göründüğünü ve bu iki adım arasındaki verimlilik değerlerinin %10'dan fazla sapmadığını doğrulayınP1 için dokuzuncu adımı seçin ve standart eğriye karşılık gelen 21 kuyuyu vurgulayın. Yazılım penceresinin sağ alt köşesinden CQ değerlerini kopyalayın.
Ardından Telomer veri sayfası şablonunu açın ve bu değerleri standart bir sayfalık sütun B'ye yapıştırın.Ardından, dokuzuncu adımın eğim değerini standart bir sayfadaki C dördüncü hücresine girin, her standart seyreltme üçlüsü için varyasyon katsayısının 0.1'in altında olduğunu kontrol edin. CFX'te, bir üçlü kopya kümesinin aralık dışına çıkmasına neden olan aykırı değer veri noktalarını analizden hariç tutun. Şimdi, miktar belirleme sekmesinde yalnızca P72 analiz dosyasındaki 1 numune kuyusunun mavi renkle vurgulandığını onaylayın.
Ardından dokuzuncu adımda, yazılım penceresinin sağ alt köşesinde bulunan CQ ve SQ değerlerini kopyalayın ve bunları D1 hücresinden başlayarak örnekler P3 sayfasına yapıştırın. CFX maestro kullanarak, analitik numuneler için tüm CQ değerlerinin standart eğrinin en düşük ve en yüksek CQ değerleri aralığında olduğundan emin olun. Excel sayfasında, NTC'deki başlangıç konsantrasyonunun, numune kuyucuklarındaki ortalama DNA miktarının %5'inden az olduğunu doğrulayın. Numune seviyesi kalite kontrolü için, numuneler P1 ve P2 sayfalarındaki J ve K sütunlarındaki standart sapmaları ve varyasyon katsayılarını inceleyin.
P1 ve P2 sayfasındaki, özellikle G sütunundaki bireysel numune ara plaka CV'lerinin 0,05'i aşmadığını doğrulayın. Bir numunenin ara plaka CV'si kabul edilebilir değerden yüksekse, her numune için hesaplamadan en fazla bir üçlü kopya çıkarın. Plaka seviyesi kalite kontrolü için, her bir plakadaki tüm numuneler arasındaki ortalama plakalar arası değişimin 0,05'ten az olduğunu kontrol edin.
Bir numunenin ara plaka CV'si kabul edilebilir değerden yüksekse, her numune için hesaplamadan en fazla bir üçlü kopya çıkarın. Ek plaka seviyesi kalite kontrolü için, P1 ve P2 levhasındaki genel plakalar arası varyasyonun 0,06'dan az olduğunu kontrol edin.
