Başlamak için, lentiviral bileşenleri 15 mililitrelik bir tüpe ekleyin ve EC tamponu ile hacmi 600 mikrolitreye çıkarın. 36 mikrolitre arttırıcı solüsyon ekleyin ve bir mililitrelik bir pipet kullanarak tekrar tekrar karıştırın, sıvının bir kısmını tekrar solüsyona çekin ve serbest bırakın. Beş dakika sonra, 120 mikrolitre transfeksiyon reaktifi ekleyin ve daha önce gösterildiği gibi yaklaşık 20 kez karıştırın.
Tüpü oda sıcaklığında 10 dakika bekletin. Sonra tüpe 5.2 mililitre cDMEM ekleyin. Tek kullanımlık bir transfer pipeti kullanarak, transfeksiyon karışımını bir T175 şişesinde kültürlenmiş HEK293T hücreleri tek tabakasına damla damla ekleyin.
Şişenin yumuşak bir yan yana sallanma hareketiyle plazmidi eşit olarak dağıtın. Kültürü 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte 48 saat inkübe edin. Floresan mikroskobu altında inkübasyondan sonra, GFP floresansını gözlemleyerek HEK293T hücrelerinin etkili transfeksiyonunu doğrulayın.
Şimdi şişeyi eğin ve 25 mililitrelik bir serolojik şerit kullanarak, hücre tek tabakasını rahatsız etmeden ortamı toplayın. Ortamı önceden etiketlenmiş 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve kapağı kapatın. Tek tabakayı bozmadan şişenin duvarları boyunca 25 mililitre ılık cDMEM ekleyin ve şişeyi inkübatöre geri koyun.
24 saat sonra, ortamı toplayın, dekontaminasyon solüsyonunu şişeye ekleyin ve sonraki 24 saat boyunca yatay olarak yerleştirin.
