Mikroakışkan Çip Kullanılarak Bakteriyel Patojenlerin Hızlı Tespiti için İnsan Balgam Örneklerinden DNA Ekstraksiyonu

Başlamak için ağız boşluğunu ve dişleri temiz suyla temizleyin. Takma dişleri olan hastalardan bunları çıkarmalarını isteyin. Hastaya derin solunum balgamını bir balgam kabına atması için kuvvetlice öksürmesini söyleyin.

DNA'yı çıkarmak için, viskozitesine bağlı olarak numuneye uygun hacimde %10 sodyum hidroksit ekleyin. Süspansiyonu 15 saniye boyunca vorteksleyin, ardından numuneyi sıvılaştırmak için 30 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Ardından, sıvılaştırılmış numunenin bir mililitresini 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne pipetleyin.

Numuneyi 15.777 G'de iki ila altı santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin. Ardından süpernatanı atmak için pipetleyin. Şimdi, tüpe bir mililitre yıkama solüsyonu ekleyin ve çökeltiyi tüpün altından kaldırmak için girdaplayın.

Süpernatanı daha önce olduğu gibi santrifüjledikten ve attıktan sonra, palete 100 mikrolitre nükleik asit ekstraksiyon solüsyonu pipetleyin. Bir pipetle, çökeltiyi aspire edin ve çözelti ile iyice karıştırın. Sıvıyı aktarın ve birlikte bir nükleik asit ekstraksiyon tüpüne çökeltin.

Tüpü beş dakika boyunca orta hızda bir girdap karıştırıcıya yerleştirin. Ardından, tüpü beş dakika boyunca 100 santigrat derece sabit bir sıcaklıkta metal bir banyoya aktarın. Son olarak, daha fazla deney yapmadan önce numuneleri 15.777 G'de iki ila altı santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin.