JoVE Journal

Neuroscience

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir.

Nanosaniye Darbeli Elektrik Alan Stimülasyonu için Dondurularak Saklanmış RSC96 Hücrelerinin Hazırlanması

Transkript

Başlamak için, bir mililitre RSC96 hücre süspansiyonu içeren kriyo şişesini 37 santigrat derece su banyosuna yerleştirin ve hızla sallayın. Hücre süspansiyonunu dört ila altı mililitre tam kültür ortamı içeren bir santrifüj tüpüne aktarın ve iyice karıştırın. Tüpü 1.000G'de üç ila beş dakika santrifüjleyin, daha sonra süpernatanı atın ve hücreleri üç mililitre tam kültür ortamında yeniden süspanse edin.

Şimdi hücre süspansiyonunu 628 mililitre tam kültür ortamı içeren bir kültür şişesine ekleyin ve gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Hücre yoğunluğu% 80 ila 90'a ulaştığında, kültür ortamını atın ve hücreleri kalsiyum ve magnezyum iyonları içermeyen PBS ile bir ila iki kez durulayın. Daha sonra kültür şişesine% 0.25 tripsin, 0.53 milimolar EDTA ekleyin.

Kuluçka işleminin sonunda, hücre ayrılmasını mikroskop altında gözlemleyin. Çoğu hücre yuvarlaklaşıp ayrıldıktan sonra, şişeyi hızlı bir şekilde çalışma alanına geri koyun ve hafifçe vurun. Sindirimi durdurmak için% 10 FBS içeren üç ila dört mililitre kültür ortamı ekleyin.

Daha sonra şişenin içindekileri iyice karıştırın ve çözeltiyi aspire edin. Hücre süspansiyonunu santrifüjleyin. Beş dakika boyunca 1.000G ekleyin.

Süpernatanı attıktan sonra, hücreleri hafif pipetleme ile bir ila iki mililitre taze kültür ortamında yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu yeni bir T25 şişesine aktarın. Bir ila iki oran ekleyin ve yedi mililitre kültür ortamı ekleyin.

Daha Fazla Video Keşfet

Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz

Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.