Nanosaniye Darbeli Elektrik Alanı (nsPEF) ile Uyarılmış RSC96 Hücrelerinde Nörotrofik ve Transkripsiyon Faktörlerinin Ekspresyonunun Saptanması

Başlamak için, kültür kaplarında elektrikle uyarılan RSC96 hücrelerini alın. Ardından, hücrelerin kapak fişi üzerinde eşit olarak dağıldığı yerlere daireler çizmek için bir histoloji kalemi kullanın. Hücrelere 50 ila 100 mikrolitre geçirgenlik çalışma solüsyonu ekleyin ve oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin.

Ardından, hücreleri her biri beş dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın. Daha sonra, dokuyu düzgün bir şekilde kaplamak için daireler içinde% 3 BSA ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Daha sonra, bloke edici çözeltiyi nazikçe çıkarın ve uygun şekilde seyreltilmiş birincil antikoru hücrelere ekleyin.

Hücre kültürü plakasını nemli bir kutuya yerleştirin ve gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra, hücreleri sürekli çalkalarken her biri beş dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın. Karşılık gelen ikincil antikoru ekleyin ve oda sıcaklığında 50 dakika inkübe edin.

İnkübasyonun sonunda, kapak fişini PBS'ye yerleştirin ve her biri beş dakika çalkalayarak üç kez yıkayın. Ardından, slaytın kurumasını bekleyin ve kurutulmuş slayta DAPI boyama solüsyonu ekleyin. Son olarak, kurumuş kapak fişini floresan için solmaya karşı dayanıklı bir montaj ortamıyla kapatın.

Alexa Fluor 488, SCI3 ve SCI5 için belirli uyarma ve emisyon dalga boylarını kullanarak görüntüler elde edin. Mikroskobik analiz, tüm gruplarda kırmızı renkte dağınık sitoplazmik S-100 beta pozitif hücreler gösterdi ve kontrol ve santimetre başına 10 kilovolt gruplarına kıyasla santimetre başına beş kilovolt grubunda S-100 beta floresansının entegre optik yoğunluğunun arttığı gözlendi. Hücre tarama deneyleri sırasında tüm gruplarda dağınık sitoplazmalı GFAP ve Sox10 pozitif hücreler gözlendi.

Bununla birlikte, GFAP ekspresyonu, santimetre başına beş kilovolt grubunda, kontrol ve santimetre başına 10 kilovolt gruplarına kıyasla önemli ölçüde daha düşüktü. Santimetre başına beş kilovolt grubundaki RSC96 hücreleri, Sox10 ekspresyonunun önemli ölçüde daha yüksek bir ortalama gri değerini gösterdi, bu da gelişmiş Sox10 ekspresyonunu düşündürdü.