Başlamak için FPLC sütununu paketleyin ve numune yükleme için numune döngüsünü hazırlayın. Şimdi yazılıma gidin. Pompa ayarlarına çift tıklayın ve Manuel Yük Döngüsü'nü seçin.
Şimdi boruyu sütun portundan akış adaptörünün üstündeki boruya bağlayın. Boruyu E döngüsünden sökün ve atık kabına yerleştirin. Daha sonra 30 mililitrelik bir şırınga kullanarak numuneyi alın ve şırıngayı enjeksiyon portu adaptörüne takın.
Şırıngayı enjeksiyon portuna vidalayın ve numuneyi enjekte edin, numune döngüsüne görünür bir şekilde enjekte edildiğinden emin olun. Şimdi enjeksiyon portunu sütun kapağıyla takın. S'nin altındaki boruyu bağlayınample döngü E bağlantı noktasına.
Ardından B pompasından gelen boruyu elüsyon tamponuna yerleştirin. Giriş sekmesine gidin ve Yeni Yöntem'i seçin. Bundan sonra, sol sütundaki Yöntem Ayarları sekmesini seçin.
Sütun Türü açılır menüsüne gidin ve Özel'i seçin. Kolon hacmini beş mililitre ve çalışma için gerekli akış hızını dakikada bir mililitre olarak girin. Birim seçimine gidin ve yöntem temel birimi olarak CV, sütun hacimleri'ni seçin.
A girişinin A1'i arabelleğe alacak ve B girişinin B1'i arabelleğe alacak şekilde ayarlandığını doğrulayın. Ardından sol taraftaki menüden Yöntem Anahattı sekmesini seçin. Dengeleme altında, dengeleme hacmini 10 CV olarak ayarlayın.Örnek Uygulama sekmesi altında, örnek döngüsünü gözlemleyerek örnek hacmini ayarlayın. Sütun Yıkama'ya gidin ve yıkama hacmini beş CV'ye ayarlayın.Elüsyon için, gradyan hacmini %0 tampon B'den %100 tampon B'ye başlayarak 14 CV'ye ayarlayın. Yöntemi kaydedin ve çalıştırmayı başlatın.
Kesir toplayıcının ilk kesirin konumundan başladığından emin olun. Çalıştırma adını girin ve Başlat'a tıklayın. Numune uygulaması sırasında, şu anda atık kabına girmekte olan tüpleri temiz bir behere geçirin.
Bu tüplerden akan bağlanmamış proteinleri akış olarak toplayın ve FT olarak etiketleyin. Çalıştırma tamamlandıktan sonra Giriş sekmesine gidin ve Çalıştırmayı Aç'ı seçin. Kromatogramı görüntülemek için çalıştırmayı açın. Elde edilen zirveleri işaretlemek için üst menüden Tepe Entegrasyonu'nu seçin.
Ayrıştırılmış protein içeren kesirleri görselleştirmek için Kesirler sekmesini seçin.
