Başlamak için, hücreler %80 birleştiğinde insan adipoz kaynaklı mezenkimal kök hücre kültüründen süpernatanı toplayın. Süpernatanı bir pipet kullanarak dikkatlice toplayın ve 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Asılı hücreleri çıkarmak için tüpü oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 x g'da santrifüjleyin, ardından peleti bozmadan süpernatanı toplamak için bir pipet kullanın.
Hücresel kalıntıları gidermek için süpernatanı 2000 x g'da dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin. Elde edilen süpernatanı bir pipetle toplayın ve büyük parçacıkları ve hücre kalıntılarını gidermek için 0,22 mikronluk bir zardan süzün. Süzüntüyü dört santigrat derecede 30 dakika boyunca 10.000 x g'de ultra santrifüjlemeye tabi tutun.
Ardından, dört santigrat derecede 70 dakika boyunca 100.000 x g'da son bir santrifüjleme yapın. Bir pipet kullanarak, peleti toplamadan süpernatanı çıkarın. Tüpü dört santigrat derecede 70 dakika boyunca 100.000 x g'da santrifüjlemeden önce peleti PBS'de yeniden süspanse edin.
Süpernatanı çıkarın ve elde edilen hücre dışı vezikül peletini veya EV'leri bir mililitre PBS'de yeniden süspanse edin. Son olarak, EV süspansiyonunu bir mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve daha fazla analize kadar dört santigrat derecede saklayın. Transmisyon elektron mikroskobu, EV'lerin iki katmanlı bir zar ile fincan şeklindeki yapısını açıkça ortaya çıkardı.
Nanopartikül izleme analizi, yaklaşık 50 ila 150 nanometre arasında bir partikül boyutu dağılımına sahip olduklarını gösterdi. Western blot analizi, EV'lerin karakteristik belirteç proteinlerinin düzgün bir şekilde ifade edildiğini gösterdi.
