Transmisyon elektron mikroskobu için retinal organoid gömme ve yarı ince dilim konumlandırma

Başlamak için, gömme kalıbının oluğuna hacminin üçte ikisine kadar saf epoksi reçine ekleyin. Retinal organoidleri toplamak için bir kürdan kullanın ve bunları saf epoksi reçine ile donatılmış gömme kalıbına aktarın. Ardından oluğu hafifçe çıkıntı yapana veya şişene kadar saf epoksi reçine ile doldurun.

Yönlü gömme için gömme kalıbının her iki ucundaki organoidlerin konumunu ayarlayın. Gömme bloğunu s'ye takınample montaj standı ve cıvatayı bir L tornavidayla vidalayın. Ardından cam bıçakları bıçak sehpasına takın ve somunu manuel olarak sıkın.

İstenilen alan açığa çıkana kadar fazla reçineyi kesin. Cam bıçağın oluğunu suyla doldurun. Yarı ince bir mikrotom kullanarak, yarı ince dilimleri bir mikron kalınlığında kesin ve bunları bir iğne ile bir mikroskop lamı üzerine koyun.

Yarı ince dilimleri boyamak için 50 mikrolitre% 1 toluidin mavisi ekleyin ve ısıtma plakası üzerinde 95 santigrat derecede bir dakika inkübe edin. İki dakika damıtılmış su ile durulayın. Bölümlerin yapısını gözlemlemek için 20x sıradan bir optik mikroskop kullanın.