Başlamak için, kriyoviyal içeren kordon kanı CD34 + hücrelerini dondurucudan çıkarın. Hücreleri 50 mililitrelik bir tüpe aktarmadan önce bir su banyosunda çözdürün. Tüpü damla damla sallarken,% 50 FBS ve mililitre DNaz başına 0.1 miligram içeren önceden ısıtılmış IMDM'nin hücre hacminin 10 katını tüpe ekleyin.
Hücre süspansiyonunu 500 G'de beş dakika santrifüjleyin. Pelet, penisilin ve streptomisin içeren 20 ila 40 mikrolitre PBS'de yeniden süspanse edilir. Hücreleri kullanana kadar buz üzerinde saklayın.
27 gauge yarım inçlik bir iğne ile üç mililitrelik bir şırınga hazırlayın. Kordon kanı CD34 + hücre süspansiyonu içeren 29 gauge 12,7 milimetrelik bir iğne ile 0,5 mililitrelik bir insülin şırıngası hazırlayın. Ardından, 100 mikrolitre buprenorfin içeren 29 gauge 0,5 inçlik bir iğne ile bir mililitrelik bir insülin şırıngası hazırlayın.
Anestezi uygulanmış fareyi bir burun konisine aktarın ve enjeksiyona hazır olduğunu doğrulamak için bir ayak parmağını kıstırın. Fareyi sırt üstü yatırın ve arka ayaklarını esnetin. Arka bacakları sabitlemek için, baskın olmayan elin başparmağını ayağına, orta parmağını kalçaya ve işaret parmağını uyluk kemiğinin dışına yerleştirin.
Diz kapağının etrafındaki saçları nazikçe koparın ve bölgeyi alkollü bir bezle silin. Şimdi 27 gauge yarım inçlik bir iğne ile üç mililitrelik bir şırınga kullanarak, deriden uyluk kemiğine doğru nazikçe bir delik açın. İğne kemiğe girdikten sonra, tüm iğne kemiğe girene kadar saat yönünde çevirin.
Yarıya kadar saat yönünün tersine çevirerek iğneyi çıkarın. İğnenin etrafını alkollü bir bezle silin ve tamamen çıkarmak için iğneyi saat yönünün tersine çevirmeye devam edin. Daha sonra, hücre süspansiyonu içeren 0.5 mililitre insülin şırıngasını femur şaftına yerleştirin.
İğne kemiğe girdikten sonra, bacaktaki tutamağı serbest bırakın ve uyluk kemiğine nazikçe 25 mikrolitre süspansiyon enjekte edin. Son olarak, buprenorfini deri altına enjekte edin ve fareyi anesteziden kurtulmasına izin vererek ev kafesine geri koyun.
