Başlamak için, DPBS'de magnezyum ve kalsiyum ile 1 ila 100 seyreltme bir kollajen stok çözeltisi hazırlayın. İlgili hazneye 350 mikrolitre seyreltilmiş stok çözeltisi ekleyin ve oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin. Kalan kollajen ve asetik asidi yıkamak için magnezyum ve kalsiyum içeren 350 mikrolitre DPBS kullanarak tüm odaları iki kez yıkayın.
Fişleri bir siteden çıkarın ve diğer tarafa geçirin. Odayı tekrar yıkadıktan sonra, üzerine 350 mikrolitre endotel hücresi büyüme ortamı ekleyin. Fişleri bir siteden çıkarın ve diğer tarafa geçirin.
Daha sonra her odaya 350 mikrolitre endotel hücre büyüme ortamı ekleyin. Endotel hücre büyüme ortamında% 80 ila% 90 hücre birleşmesi ile bir ila üç pasajlarda yetiştirilen HUVEC'leri alın. Daha sonra hücre kültürü ortamını bir T25 hücre kültürü şişesinden çıkarın ve hücreleri magnezyum ve kalsiyum içermeyen üç ila beş mililitre DPBS ile nazikçe yıkayın.
Çözelti çıkarıldıktan sonra, bir mililitre tripsin ayrışma reaktifi ekleyin ve hücreler şişeden ayrılana kadar 37 santigrat derecede beş dakika inkübe edin. Ayrılan hücreleri, magnezyum ve kalsiyum içermeyen PBS'de dokuz mililitre% 5 FBS kullanarak bir tüpe aktarın. Oda sıcaklığında beş dakika boyunca 350G'de santrifüjleyin.
Süpernatanı hareket ettirdikten sonra, hücre peletini bir mililitre endotel hücre büyüme ortamında yeniden askıya alın. İlgili hücre hacmini hazneye ekleyin ve biyoçipleri nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin. 24 saat sonra 350 mikrolitre endotel hücre büyüme ortamı ile HUVEC içeren odanın orta değişimini gerçekleştirin.
Mikroakışkan biyoçiplerde hava kabarcıkları görülürse, etkilenen odanın portlarının yanı sıra biyoçipin tüm portlarını kapatın. Hava kabarcığını boşluğun bir ucuna yaklaştırmak için çipi eğin. Diğer ucun portundan, zıt tapaları tutarken 700 mikrolitre hücre kültürü ortamını hazneden itin.
