Sıcaklık Evrimi Deneyi için Sulfolobus acidocaldarius Kültürlerinin Canlandırılması

Başlamak için, kör bir çelik teli dikkatlice ısıtmak için bir bunsen brülörü kullanın. Bir milimetre genişliğinde bir delik oluşturmak için iki mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünün kapağına delin. Delinmiş tüpleri sterilizasyon için otoklavlanabilir bir kaba yerleştirin.

Tüpler otoklavlandıktan ve soğutulduktan sonra, bunları 1,5 mililitre önceden ısıtılmış BBM ile doldurun+Şimdi bir gliserol stoğundan yaklaşık 50 ila 60 miligram Sulfolobus acidocaldarius kültürünü kazımak için bir pipet ucu kullanın. İnokulumu BBM + dolu tüplere aktarın. Negatif kontrol olarak BBM + ile aşılanmamış bir tüp bulundurun.

Delinmiş tüp kapağından herhangi bir aerosolün kaçmasını önlemek için, kapağın üstüne ısıya dayanıklı gaz geçirgen bir zar yerleştirin. Aşılanmış tüpleri aşılama için bir termomiksere yerleştirin. Kültürler gerekli optik yoğunluğa ulaştıktan sonra, tüpleri oda sıcaklığında iki dakika boyunca 5.000 G'de santrifüjleyin.

Ardından, atmak için süpernatanı pipetleyin. Pelete 1,5 mililitre ılık BBM+ ekleyin ve hücre peletini ortamda yeniden süspanse edin. Termomikserler kullanılarak yapılan inkübasyon ile geleneksel inkübatörlerdeki inkübasyon karşılaştırıldığında büyümenin benzer olduğu bulundu.