Sıcaklık Evrimi Deneyi için Sulfolobus acidocaldarius Kültürlerinin Bağımsız Soylarının Başlatılması

Başlamak için, bir sulfolobus acidocaldarius başlangıç kültürünün optik yoğunluğunu ölçmek için bir spektrofotometre kullanın. Ardından, başlangıç kültürünün 10'dan 1'e 10'dan 10'a ve 6'ya kadar seri seyreltmelerini oluşturun. Her biri 10'dan 5'e ve 10'dan 6'ya kadar seyreltmelerden 100 mikrolitre pipetleyin, daha sonra bunları katı BBM plus içeren altı oyuklu bir plakanın kuyularına aktarın.

Plakayı nemli bir bezle dolu bir kutuya, tek koloniler çıkana kadar beş ila yedi gün boyunca 75 santigrat derecede statik bir inkübatöre yerleştirin. Bir aşılama döngüsü ile tek kolonilerden istenen sayıda evrimleşen soy oluşturmak için rastgele bir koloni seçin. Koloniyi, delinmiş iki mililitrelik bir tüpte bulunan 1.5 mililitre önceden ısıtılmış BBM plus'ta yeniden süspanse edin.

Tüpü uygun şekilde etiketleyin. Birkaç koloni için yeniden süspansiyonu tekrarladıktan sonra, negatif kontrol olarak bir tüpü 1,5 mililitre ortamla doldurun. Tüplerin üst kısımlarını nefes alabilen bir zarla kapatın, ardından kültürler bulanıklaşana kadar bir termomikserde inkübe edin.

Klonal kültürleri oda sıcaklığında bir dakika boyunca 5.000G'de santrifüjleyin. Süpernatanı attıktan sonra, 200 mikrolitre BBM plus'ı tüpe pipetleyin ve peleti tekrar süspanse edin. Gliserol sapları oluşturmak için her tüpe 200 mikrolitre %50 gliserol ekleyin.

Ardından, daha fazla deney yapılana kadar sapları 80 santigrat derecede saklayın.