Sulfolobus acidocldarius kullanılarak Sıcaklık Evrimi Deneyi

Başlamak için, yeniden canlanan atalardan kalma Sulfolobus acidocaldarius popülasyonlarını kullanın. Kültürleri 0.01'lik bir OD600'e seyreltmek için BBM plus ekleyin. Yedi kültürün her birinden uygun hacmi üç ayrı delinmiş iki mililitrelik tüpe pipetleyin.

Tüpleri nefes alabilen bir zarla kapatın, ardından yedi atadan kalma popülasyonun her bir setini ayrı termomikserlere yerleştirin. Evrim deneyine başlamak için her bir termomikseri gerekli sıcaklığa ve 400 RPM'ye ayarlayın. 48 saat sonra, transfer sıfır kültürlerinin her birinin 15 mikrolitresini, transfer biri olarak etiketlenmiş delinmiş iki mililitrelik bir tüpte bulunan 1.5 mililitre ısıtılmış BBM artı ortama aktarın.

Tüpleri, ilgili termomikserlere rastgele konumlara geri yerleştirmeden önce geçirgen bir zarla kapatın. İlk aktarımı tamamlamak için plaka tabanlı bir spektrofotometrede transfer sıfırının OD600'ünü ölçün. İstenen transfer sayısına ulaşılana kadar transferleri gerçekleştirmek için kültür transferini ve optik yoğunluk ölçümünü iki günde bir tekrarlayın.

Her 10. transferden sonra ve son transferde popülasyonların gliserol stoklarını hazırlayın ve tüpü ataların popülasyon tanımlayıcısı ve transfer numarası ile etiketleyin. Termomikserler 75 santigrat derece ve 65 santigrat derece sabit sıcaklıklara ayarlanmalıdır. Kademeli değişime tepkiyi gözlemlemek için üçüncü bir termomikser kademeli olarak azaltılacaktır.