Başlamak için, bir zebra balığının eksize edilmiş yumurtalıklarını iki mililitre hücre ayrışma çözeltisi içeren altı oyuklu bir plakaya aktarın. Yumurtalıkları 28.5 santigrat derecede iki ila üç saat kuluçkaya yatırın. Sindirimi durdurmak için tampona iki ila üç mililitre önceden ısıtılmış L15 ortamı ekleyin.
Ardından, altı oyuklu plakanın başka bir kuyucuğuna 70 mikrometrelik bir hücre süzgeci yerleştirin. Kuyuya L15 medium ekleyin, orta seviyenin süzgeçten daha yüksek olduğundan emin olun. Şimdi, sindirim ortamını hücre süzgecinden çekmek için bir pipet kullanın.
Fazla ortamı bir pipetle çıkarın. Kuyuya dört mililitre taze L15 ortamı ekleyin ve oositleri yavaşça yeniden süspanse edin. Birkaç dakika sonra, süpernatanı pipetleyin.
Oositleri kalite kontrol için seçmek için, bunları taze L15 ortamı içeren 35 milimetre genişliğinde bir tabağa aktarın. Oositleri 10X veya daha fazla büyütme kullanarak ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Herhangi bir hücre parçasını, birinci aşama oositleri veya diğer aşama oositleri çıkarmak için künt bir enjeksiyon aleti kullanın.
Büyüme aşamasının doğrulanması için, oositleri içeren L15 ortamına Hoechst 33342 ekleyin ve inkübe edin. UV lazer uyarımı altında floresan mikroskobu ile oositleri gözlemleyin. İstenilen kriterlere uymayan oositleri bir iğne ile dikkatlice çıkarın.
Juvenil yumurtalık, daha küçük bir evre iki oosit popülasyonunun eşlik ettiği bol miktarda şeffaf evre birinci oosit gösterdi. Yetişkin balık yumurtalıkları, opak geç evre iki ila üç oosit baskınlığı gösterdi. Referans yöntemi, oositlerin yüzeyinde oositleri yoğun bir şekilde saran çok sayıda lekeli granüloza hücre çekirdeği ile sonuçlandı.
Buna karşılık, modifiye edilmiş yöntem, granüloza hücre çekirdeği boyamasından yoksun birinci aşama oositlerin ayrılmasına izin verdi.
