Çam testeresi, Monochamus alternatus böceklerini topladıktan sonra, böceği taze dallar içeren steril bir tüpe yerleştirin. Böcekleri nemlendirilmemiş bir inkübatörde 25 santigrat derecede geri getirin. Kuluçkadan sonra, beslenme ve hareketliliğin azaldığını gösteren böcekleri kaydedin.
Sert ölü böcekleri ıslak odalara aktarın. Mantar enfeksiyonu olan böcekleri antenler, baş, göğüs, karın, kanatlar ve bacaklar gibi ana pozisyonlara diseksiyon. Makas kullanarak, her pozisyonun bütünlüklerini küçük parçalar halinde kesin.
Bu parçaların dış yüzeyini antibiyotik içeren PDA plakasına hafifçe bastırın. Plakayı parafilm ile kapatın ve dokular tamamen miselyum ile kaplanana kadar 25 santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra tek koloniyi fenotipik özelliklere göre yeni bir PDA plakasına aktarın.
Mantar genomik DNA izolasyon kitini kullanarak genomik DNA'yı çıkarın. DNA'nın rDNA-ITS bölgesini amplifiye etmek için ITS1 ve ITS4 primerleri ile PCR karışımını hazırlayın. PDA plakasının ön ve arka taraflarındaki olgun, mantar saf koloni morfolojisini yakalamak için bir kamera kullanın.
Bir aşılama iğnesi ile saf mantar kolonilerinden conidia'yı koparın ve bir damla steril su ile bir cam slayta aktarın. Ardından, kabarcıklar oluşturmadan numunenin üzerine bir örtü astarı yerleştirin. Mantar kolonisinin kenarından bir neşter ile beş milimetrelik bir agar bloğu kesin ve bir damla steril su ile temiz bir cam slayta aktarın.
İnce bir iğne kullanarak, belirli yapıları gözlemlemek için mantarları agardan dikkatlice ayırın. Optik bir mikroskop altında, hiflerin, konidioforların, fialitlerin ve konidiaların duruşu dahil olmak üzere mantarların aseksüel morfunu gözlemleyin.
