Ağrıyı azaltmak için deri altına buprenorfin hidroklorür enjekte ederek uygun şekilde anestezi uygulanmış fare üzerinde cerrahi işleme başlayın. Kuruluğu önlemek için gözlere oftalmik merhem sürün. Fareyi sırt duruşuna getirin ve uzuvları bantlarla germe pozisyonunda sabitleyin.
Her biri en az üç kez alternatif iyot ve alkol çubukları kullanarak sırt cildini dezenfekte edin. Daha sonra, cerrahi makas kullanarak, hayvanın sol arka tarafında 0,5 ila bir santimetrelik bir kesi yapın. Göğüs duvarı ve akciğer hareketi görünene kadar kas ve yağ dokularını ayırmak için dikkatlice forseps kullanın.
Bir pipet kullanarak, seçilen bir çok hücreli steroidi veya MCS'yi bir mikroplakadan buz gibi soğuk PBS içeren bir cam Petri kabına aktarın. 100 mikrolitrelik bir cam şırıngaya 20 gauge bir iğne takın ve buz üzerinde önceden soğutun. Daha sonra önceden soğutulmuş bir PBS ve Matrigel karışımından 20 mikrolitre çekin.
Şırıngayı kullanarak, sferoidi iğnenin metal kısmında tutarak, minimum hacimde PBS-Matrigel karışımında Petri kabından bir MCS'yi hızlı bir şekilde aspire edin. İğneyi iki kaburga kemiği arasına yaklaşık üç milimetre derinliğe kadar dikey olarak nazikçe yerleştirin ve aspire edilmiş MCS'yi içeren karışımın 20 mikrolitresini yavaşça enjekte edin. Ardından iğneyi dikkatlice çıkarın.
Yaraya üçlü antibiyotik merhem sürün. Kesiyonu iki hafta sonra çıkarılacak cerrahi klipslerle kapatın. Hayvanı kızılötesi bir ısı yastığına yerleştirin ve vücut ısısını korumak için laboratuvar mendilleriyle örtün.
Hayvanı uyanana ve düzgün hareket edene kadar en az 30 ila 60 dakika izleyin. 700 nanometrelik bir kanalda küçük bir hayvan görüntüleme sistemi kullanarak, anestezi uygulanmış farenin tümör ksenogreftinden gelen IRFP floresan sinyalini her üç ila dört günde bir ölçün. Floresanı sol, sağ, dorsal ve ventral olmak üzere dört duruşta ölçün.
Hem sol hem de ventral taraflardan net floresan yoğunluğu, ventral taraftan gelen floresan, sol taraftaki floresanstan biraz daha yavaş büyüyen, benzer bir tümör ilerlemesi eğilimi gösterdi.
