Başlamak için, laminer bir başlıkta, altı oyuklu bir plakanın kuyucuklarına% 2 glikoz ile takviye edilmiş altı mililitre Soutan ortamı dağıtın. Kuyucukları 120 mikrolitre mikobakteri smegmatis ikincil kültürleri ile aşılayın. Aşılanmamış bir tane ve medya kontrolü bulundurun.
Ardından, eşit karıştırma için kültürü 1 mililitrelik bir mikropipet ile yukarı ve aşağı pipetleyin. Kapağı kapatın ve plakayı parafin film ile dikkatlice kapatın. Plakayı yedi gün boyunca 37 santigrat derecede statik bir inkübatörde inkübe edin.
Biyofilm büyümesinin görsel bir tahmini için, plakaları epi beyaz ışık aydınlatması altında bir jel dokümantasyon sistemine yerleştirin. Kuru ağırlığı ölçmek için bir yaprak kurutma kağıdı tartın. Biyofilmi altı oyuklu plakadan çıkarın ve bir spatula ile kağıda aktarın.
Biyofilmin çoğunu kültürden dikkatlice toplayın. Biyofilmi kurutma kağıdına yerleştirin. Kurutma kağıdını, biyofilm tamamen kuruyana kadar bir inkübatöre yerleştirin.
Ardından kağıdın ve biyofilmin toplam ağırlığını ölçün. Biyofilm pelikülleri 3. günden itibaren görülebiliyordu. Kültürlerin retikülasyonu, Soutan'ın ortamına %2 glikoz ilavesiyle iyileşti.
Biyofilm gelişimi 3 ila 6. günler arasında görüldü. 3. günde hafif retikülasyonu olan bir film gözlendi. Bu film 5. günde olgunlaştı ve 6. günden itibaren dağıldı.
