Akciğer örneğini T hücreleri için zenginleştirdikten sonra, her örneğe bir mililitre 10 milimolar dasatinib ekleyin. Karışımı girdaplayın ve oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin. PE veya APC konjuge peptit MHC tetramerini 10 nanomolar nihai konsantrasyona ekleyin.
Karışımı girdapladıktan sonra, oda sıcaklığında bir saat karanlıkta inkübe edin. Numune peptit MHC tetramerleri ile boyanırken, tetramer boyama inkübasyon süresinde 15 dakika kala hücre yüzey belirteçlerini boyamak için bir ana antikor karışımı hazırlayın, yüzey antikoru ana karışımını 1 ila 100 seyreltmede ekleyin. Yaklaşık beş mililitrelik bir nihai hacme ulaşmak için 50.000 akış sitometrisi sayım boncuğu ve soğuk sıralayıcı tamponu ekleyin, daha sonra 15 mililitrelik bir hacme soğuk sıralayıcı tamponu ekleyin ve tüpü dört santigrat derecede beş dakika boyunca 400 x g'da santrifüjleyin.
Süpernatanı dikkatlice aspire edin, yaklaşık 100 mikrolitre süpernatan ve hücre peleti bırakın. Şimdi numuneyi ek bir 200 mikrolitre ayırıcı tamponu ile yeniden süspanse edin ve beş mililitrelik bir FACS tüpüne aktarın.
