Başlamak için, yeni çiftleşmiş dişi fareden embriyolar elde edin. 35 milimetrelik bir Petri kabının dibinde 12 mikro damlacık Potasyum Simpleks Optimize Edilmiş Ortam hazırlayın. Mikro damlacıkları üç ila beş mililitre mineral yağ ile örtün ve Petri kaplarını dengeleme için% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede bir inkübatöre yerleştirin.
Bir transfer pipeti kullanarak, fare embriyolarını M2 ortamından KSOM ortamına aktarın. Yıkanmış embriyoları hazırlanan KSOM mikro damlacıklarına yerleştirin ve dört gün boyunca% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede inkübe edin. Avantajlı blastokistleri büyüklüklerine, iç hücre kütlelerine, trofoblast hücre sayılarına ve genişleme derecelerine göre seçin.
12 oyuklu bir kültür plakasına bir mililitre% 2 jelatin ekleyin ve 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Ardından fazla jelatini aspire edin ve plakanın tabanının tamamen kurumasını bekleyin. İnsan endometriyal adenokarsinom hücrelerini veya Ishikawa hücrelerini jelatin kaplı 12 oyuklu plakaya tohumlayın ve plakayı 24 saat inkübe edin.
Hücreleri içeren 12 oyuklu plakanın her bir oyuğuna nazikçe beş ila 15 taze blastosist yerleştirin. 48 saat sonra, plakayı üç kez hareket ettirdikten sonra bağlanma durumlarını değerlendirmek için embriyoları mikroskop altında gözlemleyin. Bağlanmamış embriyolar, hücrelerin yüzeyi üzerinde yüzer veya yuvarlanır.
Son olarak, çeşitli östrojen konsantrasyonlarının varlığında embriyo implantasyon oranını hesaplayın. Sonuçlar, 17 beta-estradiolün yakın fizyolojik konsantrasyonlarının, 17 beta-estradiol içermeyen kontrole kıyasla embriyo implantasyon oranlarını artırdığını göstermiştir. Bununla birlikte, 100 nanomolar civarında ultra yüksek 17 beta-estradiol konsantrasyonları, embriyo implantasyon oranlarını önemli ölçüde azaltmıştır.
