Başlamak için, bir mikrotüpte 30 miligram 0.7 mikrometre tungsten parçacıklarına 1.5 mililitre% 70 etanol ekleyin. Karışımı 13, 200G'de 15 dakika santrifüjleyin. Parçacıklara 1,5 mililitre steril su ekleyin, ardından girdap yapın ve tekrar santrifüjleyin.
Süpernatanı attıktan sonra, tungsten parçacıklarına 500 mikrolitre steril% 50 gliserol ekleyin. Parçacıkları kaplamak için, önce buz üzerine yerleştirilmiş bir mikrotüpe beş mikrogram iki mikronluk bir plazmit ve mitokondriyal diziyi içeren 15 mikrogram bakteri plazmidi ekleyin. Tüpe ve girdaba 100 mikrolitre tungsten parçacık süspansiyonu ekleyin.
Sonra dört mikrolitre bir molar spermidin ekleyin ve tekrar girdap yapın. Şimdi tüpe 100 mikrolitre buz gibi 2,5 molar kalsiyum klorür pipetleyin. Süspansiyonu kısa bir süre girdapladıktan sonra, 10 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edin.
Tungsten parçacıklarını 13, 200G'de dört santigrat derecede 30 saniye santrifüjleyin. Daha sonra parçacıkları eksi 20 santigrat derecede 200 mikrolitre %100 etanol içinde yıkayın. Son olarak, tungsten parçacıklarını 60 ila 70 mikrolitre oda sıcaklığında% 100 etanol içinde yeniden süspanse edin.
Biyolistik malzemeleri hazırlamak için, steril bir cam plaka üzerine altı adet sterilize edilmiş makro taşıyıcı tutucu yerleştirin. Makro taşıyıcıları altı makro taşıyıcı tutucunun her birine yerleştirmek için bir çift steril forseps kullanın. DNA kodlu tungsten parçacıklarından 10 mikrolitreyi her bir makro taşıyıcı yüzeye pipetleyin ve pipet ucu ile tüm yüzeye eşit olarak dağıtın.
rho sıfır maya reseptör suşunu iki mililitre YPR ortamında aşılayın. Kültürü gece boyunca dönen bir tekerlekte 30 santigrat derecede büyütün. Ertesi gün, 300 mikrolitre kültürü 30 mililitre taze YPR ortamı içeren bir tüpe aktarın.
Kültürü, kültür doygun hale gelene kadar 30 santigrat derecede ve dakikada 200 devirde iki gece döner bir çalkalayıcıya yerleştirin. Maya hücrelerini oda sıcaklığında beş dakika boyunca 600G'de santrifüjleyin. Süpernatanı attıktan sonra hücreleri 600 mikrolitre YPD ortamında yeniden askıya alın.
Şimdi 100 mikrolitre maya hücresi süspansiyonunu katı bir bombardıman ortamı plakasına yaymak için steril bir cam sap kullanın. Tüm kültürleri yaydıktan sonra, plakaları bombardımandan önce bir ila üç saat oda sıcaklığında inkübe edin.
