Başlamak için, parafine gömülü fare akciğer dokusu dilimi alın ve 60 dakika boyunca 65 derecelik bir fırına koyun. Boyama için, slaytı doku bölümü ile sırayla uygun solüsyonlar içeren boyama kavanozlarına daldırın. Modifiye edilmiş sodyum sitrat antijen alma solüsyonunu deiyonize su ile 50 kat seyreltin.
Antijen ekstraktını mikrodalgada yüksek güçte önceden ısıttıktan sonra, slaytı kaynatmak için 15 dakika içine yerleştirin. Slayt oda sıcaklığına soğuduktan sonra, her biri beş dakika boyunca PBS ile iki kez yıkayın. Daha sonra dokuyu her biri 10 dakika boyunca iki kez% 0.25 triton ile geçirgen hale getirin.
Dokuyu bir immünohistokimya kalemi ile çevreleyin ve slaytı oda sıcaklığında% 5 BSA ile bir saat inkübe edin. Daha sonra, izolektin B4 veya IB4'ü% 1 BSA ile 1 ila 50 oranında seyreltin. Fazla suyu çıkardıktan sonra, doku bölümünü 50 ila 100 mikrolitre seyreltilmiş IB4 ile gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin.
Slaytları PBS ile her biri beş dakika boyunca üç kez yıkayın ve 10 dakika boyunca% 0,25 triton ile geçirgenleştirin. Daha sonra doku bölümünü 50 ila 100 mikrolitre DAPI ile oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin. Üç PBS yıkamadan sonra, ışığa maruz kalmaktan kaçınarak slayta bir damla solma önleyici montaj ortamı uygulayın.
Çekirdeğin ve hedef sinyallerin görüntülerini yakalamak için havayla kurutulmuş slaytı bir floresan mikroskobu altına monte edin. Bu protokol, floresan mikroskobu altında farklı fare akciğer loblarındaki mikro endotel hücrelerinin boyanması için IB4 kullanılarak pulmoner mikrovaskülatür sisteminin hassas bir şekilde lokalizasyonunu ve gözlemlenmesini sağlar.
