Başlamak için, İzolektin B4 veya IB4 ve DAPI ile boyanmış fare akciğer dokusu bölümleri elde edin. 10x objektifli bir floresan mikroskobu altında görüntüler elde edin. Görüntüleri ImageJ yazılımına aktarın ve seçin.
Kanalları uygun şekilde bölün ve dosyayı DAPI ve IB2 kanalları için ND4 formatında yükleyin. Analiz etmek için gezinin, ölçeği ayarlayın. Görüntü parametrelerini yapılandırın ve ardından Genel'i seçin, ardından aynı görüntü aralığını ayarlamak OK.To seçin, Görüntü'ye gidin, parlaklık kontrastını ayarlayın ve Ayarla'ya tıklayın.
IB4 için görüntüleme aralığını sıfır ila 10.000 ve DAPI için sıfır ila 20.000 olarak ayarlayın. Arka planı ortadan kaldırmak için İşlem'i ve ardından matematiği tıklayın. Arka plan sinyalini, arka plandaki sihirli değnek aracı tarafından algılanan değerlere göre çıkarın.
En iyi eşik değerini seçmek için Görüntü'ye gidin ve Çoğalt'ı tıklayın. Hem Orijinal hem de Yinelenen Görüntü türünü 8 bit olarak seçin. Ardından, Görüntü sekmesi altında, Ayarla'yı ve ardından Eşik'i seçin ve Modları Girin.
En gerçekçi eşiği seçtikten sonra Koyu Arka Plan'ı seçin ve uygulayın. Sihirli değnek aracını kullanarak, çoğaltılan görüntüye kıyasla daha büyük kan damarlarını seçin, ardından büyük arterlerden ve damarlardan gelen IB4 pozitif sinyalleri ortadan kaldırmak için Sil'e tıklayın. Hedef sinyallerin sayısını saymak için Analiz Et'e ve ardından Ölçümleri Ayarla'ya tıklayın ve Alan, Eşikle sınırla ve Görüntüleme etiketi'ni işaretleyin.
Ardından Parçacıkları Analiz Et'i seçin ve Boyut'u sıfırdan sonsuza kadar, Dairesellik'i sıfırdan bire ve Kaplama Maskeleri Olarak Göster'i değiştirin. Özetle'yi işaretleyin ve Tamam'a tıklayın. Son olarak, Özet'i seçin. Dosya'ya tıklayın ve sonuçları kaydedin.
Kraniyal, orta, kaudal, aksesuar ve sol akciğer loblarındaki IB4 pozitif odakların yüzdesi, ImageJ analizi kullanılarak genç ve orta yaşlı fareler arasında ayırt edilebilir.
