Solventle temizlenmiş insan kalp dokularının gelişmiş 3D konfokal görüntülemesi

Başlamak için, konfokal mikroskopi odasına sığacak şekilde% 4 paraformaldehitle sabitlenmiş insan kalp dokusunu incelemek için bir neşter kullanın. Kalp örneklerini kademeli bir metanol serisinde her biri oda sıcaklığında bir saat boyunca çalkalama ile kurutun, ardından gece boyunca %66 diklorometan ve çalkalama ile %33 metanol çözeltisine daldırın. Ertesi gün, belirtilen adımları uygulayarak numuneyi ağartın.

Daha sonra numuneyi, her biri bir saat boyunca çalkalayarak dereceli bir metanol serisi ile yeniden sulandırın. İmmün etiketlemeden sonra, dokuyu görüntülemeye hazırlamak için aşağıdaki adımları gerçekleştirin. Yapıştırıcı içeren bir hazneyi bir slayta yapıştırın ve haznenin çevresine oje sürün.

5X lens ile donatılmış dik lazer taramalı konfokal mikroskobu açın. Kullanılan floroforların emisyon spektrumlarına uygun lazer çizgilerini kullanarak, 1024 x 1024 çözünürlükte Döşeme taraması ve z-yığını görüntüleri elde edin. Mikro ölçek düzeyinde, kalp örneklerinin doku temizliği, kardiyak nöronları içeren ganglionların görselleştirilmesine ve miyokard innervasyonunun nöral modellenmesine izin verir.