İn Vitro Anjiyogenezin Araştırılması için İnsan Umbilikal Ven Endotel Hücrelerinin (HUVEC'ler) Çizik Yara Migrasyon Testi

Başlamak için, 100 mikrolitre HUVEC hücresini 96 oyuklu bir plakanın kuyucuklarına tohumlayın. Hücre çökelmesini kolaylaştırmak için plakayı altı saat boyunca% 5 karbondioksit altında% 37 santigrat derecede bir hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin. Daha sonra, her bir oyuktaki ortamı,% 2 FBS içeren 100 mikrolitre endotel hücre büyümesi bazal ortamı ile değiştirin ve tekrar inkübe edin.

Ertesi gün, plakayı 96 iyi yara yapıcı bir alete yerleştirin. Bir çizik oluşturmak için cihazın kolunu aşağı bastırın. Çift çizilmeyi önlemek için kolu serbest bırakmadan önce yara yapıcı aletin kapağını dikkatlice kaldırın.

Kuyuları 200 mikrolitre FBS takviyeli endotel hücre büyümesi bazal ortamı ile iki kez yıkayın. Toplam döküntülerin uzaklaştırılmasını onayladıktan sonra, hazırlanan stimülasyon veya kontrol solüsyonlarından 100 mikrolitre pipetleyin. 24 saat boyunca her saat başı görüntü elde etmek için canlı hücre görüntüleme mikroskobu kullanın.

Pozitif kontrol, orijinal çizik alanda başarılı bir migrasyon gösterdi. Teknik sorunlar, yamalı hücre büyümesi, çift çizik veya çizik sınırlarında dalgalar olarak görüldü. Göreceli yara mesafesinde% 25'lik bir artış optimal olarak kabul edildi.

Pozitif ve negatif kontrollerin yanlış ayrılması, düşük dinamik aralığı gösterdi.