İmmünohistokimyasal Analiz için 2D İnsan Umbilikal Ven Endotel Hücresi (HUVEC) Kültürlerinin Sabitlenmesi ve Bloke Edilmesi

Başlamak için, 50 mililitrelik bir tüpe metanol içinde 30 mililitre% 5 potasyum hidroksit ekleyin. Tüpte 12 milimetre çapında 100 kapak fişini sürekli çalkalama altında 30 dakika inkübe edin. Daha sonra, kapak fişlerini 30 dakika boyunca demineralize suda yıkayın.

Yıkama tamamlandıktan sonra, kapak fişlerini saklama için %70 izopropil solüsyona aktarın. Kapak fişlerini kaplamak için önce kare bir Petri kabının duvarına ayrı ayrı yaslayın. İzopropil alkol buharlaştığında, bunları 24 oyuklu bir plakaya aktarın.

Her bir oyuğa PBS'de bir mililitre kollajen pipetleyin ve inkübe edin. Daha sonra, kapak fişlerini her biri bir mililitre PBS ile beş dakika boyunca yaklaşık 4 ila 5 kez yıkayın. Kültürlenmiş HUVEC'leri kaplanmış kapak kızakları ile kuyucuklara pipetleyin.

Hücreleri istenen bir süre boyunca kültürledikten sonra, hücreleri bir mililitre PBS'de beş dakika boyunca yıkayın. Hücreleri oda sıcaklığında 20 dakika boyunca bir mililitre% 2 paraformaldehit içinde sabitleyin. Şimdi, hücreleri her biri beş dakikalık 3 ila 4 yıkama döngüsü boyunca bir mililitre PBS'de durulayın.

Son olarak, boyamadan önce kuyu plakasına bir mililitre engelleme tamponu pipetleyin.