Başlamak için, eskittikten sonra numuneye monte edilmiş slaydı edinin. Slaytı ön işleme tabi tutmak için, belirtilen süre boyunca uygun çözeltiler içeren coplin kavanozlarına seri olarak batırın. Dokuyu 100 ila 200 mikrolitre proteinaz K sindirim tamponu ile sindirin ve oda sıcaklığında bir dakika inkübe edin.
Sindirimi durdurmak için, slaytı hemen her biri iki dakika boyunca seri olarak etanol çözeltilerine daldırın. FISH hibridizasyon karışımını slayta uygulayın ve numuneyi bir lam ile örtün. Slaytları, iki ila beş dakika boyunca 75 santigrat derecede Slide Moat hibridizasyon sistemi gibi bir sıcak plakaya yerleştirin.
Ardından, gece boyunca hibritlemek için sürgüyü 37 santigrat dereceye ayarlanmış başka bir sıcak plakaya aktarın. Ardından, sürgüyü ılık yıkama tamponuna batırın ve kapak fişini dikkatlice çıkarın. Karanlıkta uygun reaktifleri kullanarak slaytı yıkayın ve lekeleyin.
Slaytı bir saniyeden fazla olmamak üzere hızlı bir şekilde deiyonize suya batırın ve bir kağıt havlu üzerine koyun. Kuruduktan sonra, sürgüyü solmaya karşı dayanıklı montaj ortamıyla monte edin. Kapak fişini yerleştirin ve görüntülemeden önce oje ile kapatın.
60X yağ lensi kullanarak, floresan sinyalini birden fazla Z yığınında yakalayın. Son olarak, en iyi çözünürlüğü elde etmek için maksimum bir 3D projeksiyon gerçekleştirin ve evrişim giderme veya diğer arka plan temizleme algoritmalarını uygulayın. Üçlü negatif meme kanseri örneklerinde, nükleer FISH öncelikle çekirdek başına iki farklı nokta gösterir ve bu da iki ERBB2 sinyalini temsil eder.
Buna karşılık, HER2 pozitif numuneler, farklı gen amplifikasyonu modellerini gösteren bol miktarda FISH sinyali gösterir. Ek olarak, HER2 pozitif örneklerdeki bazı çekirdekler, artan gen amplifikasyonu için odak noktaları olan ekstra kromozomal DNA merkezlerini düşündüren kümeler sergileyebilir.
