Başlamak için, ticari kemirgen gıda üreticilerinden folik asit veya kolin eksikliği olan yem alın. Özel diyet, kilogram folik asit başına 0.3 miligram veya tartrat ile kilogram kolin başına 300 miligram içerir. Bu özel diyette dişi bir fareyi dört ila altı hafta boyunca koruyun.
Daha sonra, yavrular anneden sütten kesildiğinde, onları folik asit veya kolin eksikliği olan bir diyete ve ayrıca bir kontrol diyetine yerleştirin. Yavruları ötenazi yaptıktan sonra, biyokimyasal analiz için kan örneğini ve karaciğer dokusunu toplayın. Kanı EDTA kaplı bir tüpe ekleyin ve tek karbonlu metabolitlerin konsantrasyonunu belirlemek için kan plazmasını izole etmek için tüpü santrifüjleyin.
Ardından, kesilmiş karaciğer dokusu örneklerini ani dondurma için bir kriyo-depolama tüpüne aktarın. Çiftleşmeden önceki dört hafta boyunca kontrol, kolin veya folik asit eksikliği olan diyetlerdeki dişi farelerin başlangıç ve haftalık ağırlıkları önemli bir fark göstermedi. Maternal tek karbonlu metabolit konsantrasyonları, folik asit eksikliği olan diyete maruz kalan farelerin plazmasında kontrol farelerine kıyasla biraz düşüktü.