Tohumlamaya başlamak için, altı oyuklu bir plakada DMEM'de gece boyunca yetiştirilen Hep G2 kültürü. Hücreleri 24 saat boyunca 37 santigrat derecede kültürleyin. İnkübasyondan sonra, her bir oyuğa oleik asit içeren iki mililitre hücre kültürü ortamı ekleyin.
Hücreleri 37 santigrat derecede 24 saat inkübe edin. Ertesi gün, kültür ortamını çıkarın ve hücreleri PBS ile iki kez yıkayın. Her kuyucuğa bir mililitre yağ kırmızısı O sabitleyici ekleyin ve 30 dakika inkübe edin.
Fiksatifi atın ve hücreleri damıtılmış suyla iki kez yıkayın. Her oyuğa bir mililitre% 60 izopropanol ekleyin ve 30 saniye inkübe edin. İzopropanolü attıktan sonra, bir mililitre taze hazırlanmış yağ kırmızısı O leke çözeltisi ekleyin ve 20 dakika inkübe edin.
Şimdi, bir mililitre% 60 izopropanol ekleyin ve 30 saniye inkübe edin. Fazla boyayı çıkarmak için hücreleri beş kez suyla yıkayın. Mikroskobik görüntülemeden sonra, bir bilgisayarda damıtılmış su ile kaplı hücreleri gözlemleyin.
Görüntülemeden sonra, suyu plakadan çıkarın ve kurumasını bekleyin. Her oyuğa iki mililitre izopropanol ekleyin ve plakayı bir orbital çalkalayıcı üzerinde 10 dakika çalkalayın. 100 mikrolitre hücre süspansiyonunu, her grupta 16 kuyucuklu 96 oyuklu bir plakaya aktarın.
510 nanometrede bir mikroplaka okuyucuda, lipit içeriğini hesaplamak için optik yoğunluğu ölçün. Kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında, oleik asit ile muamele edilen Hep G2 hücreleri, daha yüksek lipid damlacık oluşumunu gösteren artan kırmızı lekelenme yoğunluğu gösterdi. Hep G2 hücrelerindeki lipid damlacıkları ve lipitler, artan oleik asit konsantrasyonları ile artmıştır.
