Hipoksik RPE'de Mitokondriyal Metabolizmadaki Değişikliklerin Resipher Sistemi Kullanılarak Ölçülmesi

Başlamak için, algılama kapağını davlumbazdaki hücre kültürü plakası ile monte edin ve bunları hipoksi odasına aktarın. Sandviçi hipoksi odasına yerleştirin. Bundan sonra, nemin korunmasına yardımcı olmak için hipoksi odasına steril su içeren bir Petri kabı yerleştirin.

Son olarak, hipoksi odasına taşınabilir bir oksijen sensörü yerleştirin. Ardından, hipoksi odasını kapatın. USB kablosunun hipoksi odasından çıktığından ve kablonun çıktığı deliğin macun veya silikon gres ile kapatıldığından emin olun.

Hipoksi odasını, hipoksik oksijen konsantrasyonuna ve standart bir hücre kültürü karbondioksit konsantrasyonuna sahip bir gaz silindirine bağlayın. Oksijen sensörü istenen oksijen konsantrasyonunu gösterene kadar, genellikle %1 ile %10 arasında, hipoksi odasındaki havayı, silindirden gelen %1 oksijen ve %5 karbondioksit havasıyla yavaşça değiştirin, hipoksi odasının giriş ve çıkış valflerini kapatın ve tüm odayı inkübatöre aktarın. Ardından denemeyi ayarlayın ve başlatın.

Atmosferik oksijenle dengelenen ortamın daha yüksek hacimlerde dengeye ulaşması daha uzun sürdü. Hipoksi odası yavaş bir sızıntı gösterdi ve oksijen seviyelerinin atmosferik konsantrasyona 30 saat yaklaşmasına neden oldu. Oksijen çözünürlüğü, taze ve şartlandırılmış ortamlar arasında aynıydı, bu da zaman içinde ortam bileşimi değişikliklerinin oksijen çözünürlüğünü etkilemediğini gösterdi.