Hücre Duvarı ile İlgili Enzimlerin Analizi için Buğday Apoplastından Hücreler Arası Yıkama Sıvısının Ekstraksiyonu

Başlamak için, kesilen uçlardaki sitozolik kontaminasyonu gidermek için buğday yaprağı parçalarını damıtılmış suda iki kez durulayın. Yaprak parçalarını, bir ekstraksiyon tamponu içeren kalın duvarlı bir cam tüpe yerleştirin. Bir su jeti pompası kullanarak, yaprakları ekstraksiyon tamponu ile emprenye etmek için beş dakika boyunca vakum sızması uygulayın.

Yaprak parçalarını cam tüpten çıkarın ve bir kağıt havluyla kurulayın. Kurutulmuş yaprak parçalarını, delikli bir disk ile donatılmış önceden soğutulmuş bir santrifüj tüpüne dikey olarak yerleştirin. Yaprakları 500G'de 4 santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin.

100 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, süpernatanı önceden soğutulmuş 1,5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Toplanan süpernatanı kullanana kadar eksi 20 santigrat derecede saklayın.