Başlamak için, mikrodalga destekli ekstraksiyon için seyreltilmiş% 60 çözücüleri çalışma platformuna yerleştirin. Kahve gümüşü kabuğunun 0.67 gramını tartın ve bir reaksiyon kabında bir ila 30 oranında 20 mililitre ekstraksiyon çözücüsü ile karıştırın. Numune içinde ısının ve çözücünün eşit dağılımını sağlamak için kaba manyetik bir karıştırma çubuğu ekleyin.
Kabı özel bir aletle sıkıca kapatın ve mikrodalga destekli ekstraksiyon odasına yerleştirin. Yöntemi ayarlamak için monitörün üst çubuğundaki araç kutusu simgesine tıklayın ve aksesuar bölümünde SK eT rotorunu seçin. Ardından karıştırmaya tıklayın ve karıştırma hızını ayarlamak için %20 yazın.
Kapı kilidi sektörüne tıklayın ve 80 santigrat dereceyi aşan sıcaklıklarda etkinleştirilecek şekilde ayarlayın. Ardından üst çubuktaki tablo simgesine tıklayın ve T1 sıcaklık gradyanını 10 dakikalık bir ekstraksiyon süresine ayarlayın. 1800 watt'a kadar mikrodalga gücü ve 120 santigrat dereceye kadar sıcaklık.
Karıştırmayı etkinleştirmek için karıştırma düğmesine tıklayın ve yeşil ışık görünene kadar bekleyin. Üfleyici fan hızını üçüncü seviyeye ayarlayın. Ekstraksiyon süresini korumak için, ekstraksiyon süresini 2 dakikaya, mikrodalga gücünü 15 watt'a ve sıcaklığı 1800 santigrat dereceye ayarlayarak istenen ekstraksiyon sıcaklığını T120 seçin.
Şimdi, ekranın sol alt köşesindeki soğutma düğmesine tıklayın ve 10 dakikalık soğutma süresini seçin. Ekranın sağ üst köşesindeki Kaydet simgesine tıklayın. Kullanılan damar sayısını seçerek ekstraksiyon işlemine başlayın.
Ekstraksiyonun ardından, santrifüj ekstraktları 9072g'de dört santigrat derecede 15 dakika boyunca ekstrakte edilir. Süpernatanı 10 mililitrelik bir cam pipetle toplayın ve eksi 20 santigrat derecede saklayın. Kahve gümüş deri özlerini 96 oyuklu bir plakada damıtılmış su ile on kat seyreltin.
Seyreltilmiş numunenin 10 mikrolitresini 20 mikrolitre seyreltilmemiş folin-ciocalteu reaktifi ile karıştırın ve üç dakika reaksiyona girmelerine izin verin. Daha sonra, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğundaki karışıma 100 mikrolitre% 7.5 sodyum karbonat çözeltisi ekleyin. Damıtılmış su ile seyrelterek gallik asit standart konsantrasyon aralığı için farklı konsantrasyonlar hazırlayın.
Bunları 20 mikrolitre folin-ciocalteu reaktifi ile karıştırın ve üç dakika reaksiyona girmelerine izin verin. Daha sonra, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğundaki karışıma 100 mikrolitre% 7.5 sodyum karbonat çözeltisi ekleyin. Reaksiyonu karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin.
Bir mikroplaka okuyucuda, reaksiyon karışımının absorbansını 765 nanometrede ölçün. Standart kalibrasyon eğrisini 765 nanometrede standart konsantrasyonlarını ve absorbansı kullanarak çizin. Sonuçları, numunenin gramı başına miligram gallik asit eşdeğeri olarak ifade edin.
Sulu 1, 2 heksandiol ekstraksiyonu en yüksek toplam fenolik içeriği verdi ve su ekstraksiyonu en düşük verimi verdi. Sulu 1, 2 heksandiol ekstraksiyonu en yüksek toplam flavonoid içeriğini verdi ve sulu izopentildiol ekstraksiyonu en düşük olanı verdi. Sulu heksilen glikol ekstraksiyonu en yüksek DPPH tahlil değerini sergiledi ve sulu etanol ekstraksiyonu en düşük değeri sergiledi.
Sulu pentilen glikol ekstraksiyonu en yüksek ABTS tahlil değeri ile sonuçlandı ve su ekstraksiyonu en düşük ile sonuçlandı. Sulu heksilen glikol ekstraksiyonu en yüksek FRAP değerini gösterdi ve su ekstraksiyonu en düşük değeri gösterdi.
