Başlamak için, bir litrelik bir behere yerleştirilmiş domuz gözlerini alın. Cımbızla bir göz küresi tutun ve ekstra oküler dokuları steril bir Petri plakasında makasla çıkarın. Epitel yaralanması için, sterilize edilmiş tüy bırakmayan mendiller kullanarak göz küresini tutun ve korneanın merkezini altı milimetrelik bir trephine ile işaretleyin.
Daha sonra küçük bir neşter veya köşeye köreltilmiş yumuşak bir tıraş bıçağı kullanarak, trephine işaretli daire içindeki epitel hücrelerini nazikçe kazıyın. Bazal zarın sağlam kalmasını sağlarken tüm hücre kalıntılarını temizleyin. Daha sonra yara bölgesini pamuklu çubuklarla temizleyin.
Bir neşter ve makas kullanarak, korneo-skleral jantlar boyunca keserek göz küresini inceleyin. Daha sonra korneaları PBS içeren sterilize edilmiş 500 mililitrelik bir beherde durulayın. Daha sonra, eksize edilen korneaları baş aşağı steril bir kalıba yerleştirin.
Endotelyal kornea boşluğunu, 48 santigrat derecede tutulan% 1 agaroz içeren minimum esansiyel bir ortam veya MEM ile doldurun. Şimdi, korneaları ters çevirin ve 35 milimetrelik bir tabağa aktarın. Merkezi korneanın yüzeyine damla damla test ajanı olsun veya olmasın iki mililitre MEM ekleyin, epitel havaya maruz kalırken limbal konjonktiva bölgesinin kaplandığından emin olun.
Daha sonra kültür kaplarını 37 santigrat derecede nemlendirilmiş% 5'lik bir karbondioksit inkübatörüne yerleştirin. Yaradan 40 saat sonra, yaralı kültürlenmiş korneaları Richardson boyama solüsyonu ile boyayın. Lekeli korneaları fotoğraflamadan önce PBS ile yıkayın.
Daha sonra orijinal yarayı işaretlemek için aynı boyutta trephine kullanın ve küçük bir neşter kullanarak, işaretli daireler içindeki epitel hücrelerini kazıyın. Toplanan hücreleri çıkarın ve önceden soğutulmuş bir santrifüj tüpüne aktarın. Kalan yara alanı, nepafenak ile tedavi edilen kornealarda% 0.1, bromfenak% 0.09 ve ketorolak% 0.45 ile tedavi edilen kornealarda, mililitre başına 0.2 ve 0.5 mikrogramda LL-37 ile tedavi edilen kornealar, tedavi edilmeyen kornealara kıyasla yüksek glikoz koşulları altında önemli ölçüde hızlandırılmış yara iyileşmesi gösterdi.
