Başlamak için, 10 mililitrelik bir şırıngaya büyük bir P200 kesilmiş pipet ucu takın ve PBS ile doldurun. Şırınga ucunu ötenazi fareden izole edilmiş bir bağırsak segmentinin açıklığına sokmak için forseps kullanın. Bağırsak segmentini şırınga üzerinde forseps ile tutun ve içeriği çıkarmak için saniyede yaklaşık 50 mikrolitre hızında hafifçe yıkayın.
Bağırsak içeriğini boş bir tartı teknesine toplayın. Daha sonra ıslak bağırsak segmentini kuru etiketli selüloz filtre kağıdı şeridi üzerine düz bir çizgi halinde yerleştirin. Diseksiyon makası kullanarak, bağırsağı mezenterik çizgi boyunca uzunlamasına açın, bir seferde yaklaşık beş milimetre.
Kesilen dokuyu filtre kağıdının üzerine düz bir şekilde yerleştirmek için makasın alt kenarını veya bir çift forseps kullanın. Şimdi, sabitleme sırasında kıvrılmasını veya şeklini kaybetmesini önlemek için bağırsak segmentinin üzerine başka bir filtre kağıdı parçası yerleştirin. Dokuyu yerine sabitlemek için, dokuyu zımbalamaktan kaçınırken filtre kağıdının kenarlarını zımbalayın.
Dokuları% 10 normal tamponlu formaline batırın. Bağırsağın lümen tarafına dokunan üst filtre kağıdı parçasını nazikçe çıkarın. Atmadan önce filtre kağıdının alt parçasından bağırsağı dikkatlice soymak için forseps kullanın.
Daha sonra formalini dokudan çıkarmak için dokuyu PBS'de üç kez yıkayın. Ters etkili forseps kullanarak, lümen tarafı yukarı bakacak şekilde kısa kenar boyunca bir parça bağırsak alın ve dokuyu yuvarlamak için forsepsleri çevirin. Mendili kuru bir tartı teknesine yerleştirin.
Bir elinizle forseps ile dokuyu yerinde tutun. Ters etkili forsepsleri dikkatlice açın ve dokuyu ters etkili forsepslerden çıkarmak için diğer forsepsleri kullanarak dokuyu serbest bırakın. Dokuya 00 numara bir diseksiyon pimi yerleştirin.
Pimin keskin ucunu çıkarmak için tel kesiciler kullanın. Tüm numuneler yuvarlandıktan sonra, dört doku rulosunu da aynı kasete yerleştirin ve kaseti bir doku işlemcisine yerleştirin. Bir gömme istasyonunda, bir kalıba az miktarda parafin yerleştirin.
Dört İsviçre rulosunu kasetten çıkarın ve mümkün olduğunca düz bir şekilde yerleştirerek ayrı bir kalıba yerleştirin. Kalıbı doldurmak için daha fazla parafin ekleyin. Kalıbı soğuk tabağa taşıyın ve tüm İsviçre rulolarının kalıbın altında düz olduğundan emin olun.
Kalıba etiketli küçük bir kaset üstü yerleştirin. Balmumu katılaştıktan sonra bloğu kalıptan çıkarın.
