Başlamak için, büyük bir sürgülü kutu alarak ve kapağa yapışmış karton kapağı çıkararak nemlendirilmiş bir oda hazırlayın. Nemli kağıt havluları sürgülü kutunun tabanına dikey olarak yerleştirin ve düz durduklarından emin olun. Slaytı deparafinizasyon, rehidrasyon, antijen alımı ve yıkama ile boyama için hazırlayın.
Slaytı PBS'den çıkarın ve dokudan kaçınırken fazla PBS'yi silin. Hidrofobik bir kalemle, bir bariyer oluşturmak için dokunun etrafına bir kutu çizin. Anahat slaytını nemli kağıt havluların üzerine yatay olarak yerleştirin.
Dokuyu kaplamak için yaklaşık 100 mikrolitre bloke edici tampon ekleyin. Nemlendirilmiş odayı kapatın ve slaytları oda sıcaklığında 90 dakika inkübe edin. Ardından, engelleme solüsyonuna yavaşça dokunun.
Dokuyu kaplamak için hazırlanan fare bloğunu hemen ekleyin ve oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. İnkübasyonun sonunda, slaytları nemlendirilmiş odadan çıkarın ve doğrudan PBS'ye batırılmış bir slayt rafına yerleştirin. Ardından, slaytları PBS'den kaldırın.
Fazla PBS'yi nazikçe kapatın ve bunları nemlendirilmiş odaya yatay olarak geri yerleştirin. Dokuyu kaplamak için uygun şekilde seyreltilmiş primer antikorları ekleyin. Slaytlar nemlendirilmiş odadan çıkarıldıktan sonra, birincil antikorları nazikçe vurun ve slaytları beş dakika boyunca PBS'ye batırılmış bir slayt rafına yerleştirin.
Slaytları PBS'den çıkardıktan ve fazla PBS'yi bıraktıktan sonra, bunları nemlendirilmiş odaya yatay olarak geri yerleştirin. Dokuyu kaplamak için uygun şekilde seyreltilmiş ikincil antikor floroforları veya ilgilenilen konjuge birincil antikorları ekleyin. Ardından, karanlıkta oda sıcaklığında inkübe etmeden önce uygun şekilde seyreltilmiş Huist'i doğrudan doku üzerine ekleyin.
Bundan sonra, slaytları karanlıkta beş dakika boyunca PBS ile doldurulmuş solvente dayanıklı yeni bir kaba yerleştirin. Her seferinde bir slaydı kaldırın ve kalan slaytları karanlıkta PBS'ye batırılmış halde tutun. Fazla PBS'yi çıkardıktan sonra, dokunun merkezine bir ila iki damla antifade montaj ortamı ekleyin.
Temiz bir kapak kızağını kenarlarından tutun ve 45 derecelik bir açıyla yavaşça sürgünün üzerine indirin. Dokunun merkezinden başlayarak, iki parmağınızla kapak fişine hafifçe bastırın. Vakuma bağlı serolojik bir pipetin ucuna kesilmiş, filtrelenmemiş bir P200 pipeti takın.
Kapak kaymasının kenarlarını takip ederek, fazla montaj ortamını çıkarmak için vakumu kullanın. Yeni bir sürgü kutusunda, oda sıcaklığında karanlıkta kurumaya bırakmadan önce sürgüyü yatay olarak düz bir şekilde yerleştirin. Mikroskobik görüntüler, farklı bağırsak segmentlerinin morfolojisini ve goblet hücreleri için boyanmayı gösterdi.
Apikal zar, epitel hücrelerinin lateral zarı ve çekirdekler. Bağırsağın immünofloresan boyanması, proliferatif hücreler, interstisyum, lizozomal alan ve epitel dahil olmak üzere birçok farklı hücresel bölmeyi vurguladı.
