Hacim elektron mikroskobu kullanarak fotoreseptör-sinapsları incelemek için retina örneklerinin gömülmesi

Başlamak için, farelerden retina şeritlerini alın ve 15 dakika boyunca 0.1 molar sodyum kakodilat tamponunda beş kez yıkayın. Daha sonra şeritleri potasyum ferrosiyanür ve osmiyum tetroksit çözeltisi ile karanlıkta buz üzerinde 1.5 saat inkübe edin. Şeritleri çift damıtılmış suda üç kez yıkayın ve% 1 tiyo-karbo-hidrazid ile inkübe edin.

Çift damıtılmış su ile duruladıktan sonra, retina şeritlerini sırayla osmiyum tetroksit, uranil asetat ve kurşun nitrat ile işlemden geçirin. Retina şeritlerini artan etanol konsantrasyonları ile kurutun. Daha sonra, retina şeritlerini 20 dakika boyunca eşit etanol ve aseton içeren bir çözelti ile tedavi edin, ardından her biri 20 dakika boyunca iki aseton yıkaması yapın.

Retina şeritlerini aseton reçine karışımlarında karanlıkta oda sıcaklığında sırayla inkübe edin. Retina şeritlerini 45 santigrat derecede 24 saat boyunca saf reçine ile sızdırın, ardından 60 santigrat derecede 48 saat boyunca taze reçine ile sızın. Bu yöntemi kullanan retinal fotoreseptör terminallerinin odaklanmış iyon ışını taramalı elektron mikroskobu, hücre zarı yapısını ve vezikül ana hatlarını geleneksel çift fiksasyon yönteminden daha net bir şekilde korur.