Başlamak için, plastik torbalarda tutulan pamukçuk aşılı kavak yapraklarını alın. Plastik koruyucu filmleri yapraklardan dikkatlice çıkarın ve miselyum zararlarını yaprak yüzeylerinden nazikçe çıkarın. Nekrotik lekelerin şeklini ve rengini inceleyerek her kavak klonunun yaprak patotiplerini gözlemleyin ve tanımlayın.
Sonra yaprakları siyah bir arka plan üzerinde bir cetvel içine yerleştirin. Yaprakların alt yüzeyini bir kamerayla fotoğraflayın veya inç başına 300 noktanın üzerinde çözünürlüğe sahip görüntüler elde etmek için bir tarayıcı kullanarak tarayın. Hastalıklı yaprakların görüntülerini ImageJ, 1.54G yazılımında açın.
ImageJ'deki ölçeği yaprak görüntülerde görünen cetvele göre ayarlayın. Ardından ImageJ'deki Değnek aracını kullanarak yapraklardaki lezyonları tanımlayın ve her nekrotik noktanın alanını ölçün. Tüm nekrotik noktaları ölçtükten sonra, alan değerlerini kaydedin ve daha fazla analiz için bu değerleri bir elektronik tablo olarak dışa aktarın.
Miselyum kaplı akran bölgelerin etrafındaki lezyonlar, PDA kaplı bölgelerin etrafındakilerden önemli ölçüde daha büyükse, bunları hastalık bölgeleri olarak sınıflandırın. Miselyum kaplı akran bölgeler lezyon rengi, hif benzeri yapılar pycnidia ve conidia gibi değişiklikler gösteriyorsa, bunları hastalık bölgeleri olarak tanımlayın. Her kavak melezi klonu için etkili PDA lezyon noktalarının ortalama alanını hesaplayın.
Miselyum aşılanmış noktaları başlangıçlı ve başlangıçsız olmak üzere iki kategoriye ayırın. Daha sonra test edilen kavak klon hastalığı insidans oranını hesaplayın. Yapraklardaki hastalıklı lekelerin ortalama alanını hesaplayın.
Test edilen tüm kavak klonlarındaki hastalıklı noktaların ortalama alanlarına dayanarak, beş seviyeli bir hastalık derecelendirme standardı belirleyin. Beş seviyeli hastalık derecelendirme standardını kullanarak her bir kavak klonunun hastalık indeksini hesaplayın. Daha sonra, Shapiro-Wilk testini kullanarak, kavak klonlarının sayısının farklı direnç seviyelerindeki normal dağılımını doğrulayın.
Hastalık indeksine dayanarak, test edilen tüm kavak klonlarını beş veya yedi direnç grubuna ayırın. Çok yüksek direnç, yüksek direnç, direnç, direnç yok ve duyarlılık yok, duyarlılık, yüksek duyarlılık ve çok yüksek duyarlılık. Kök pamukçuk patojeninin neden olduğu nekrotik lezyonların ve hatta kavak yapraklarında piknidi benzeri yapıların aşılanması.
Ayrıca, yaprakların yaprak pozisyonları ve ışık koşulları, yaprakların hastalık şiddetini etkiler.
