RBPR2 ve STRA6 peptitleri için Kinetik testi ayarlamak için, fare RBPR2, mutant RBPR2 ve STRA6 peptitlerini çalışan tamponda seri olarak seyreltin. Kontrol yazılımını açın ve Kinetic SOAR Affinity sihirbazını seçin. Enjeksiyon dizisi iletişim kutusunda, Akış hücresi 2.1'i etkin ve Akış hücresi 1'i referans olarak seçin.
Kurulum iletişim kutusunda, başlangıç döngülerini çalıştır seçeneğini işaretleyin, çözümü arabellek olarak girin, döngü sayısını belirtin ve ileri'ye tıklayın. Şimdi enjeksiyon parametreleri diyaloğuna gidin ve 120 saniyelik temas süresi, dakikada 30 mikrolitre akış hızı ve 300 saniyelik ayrışma süresi gibi örnek parametreleri girin. Rejenerasyon parametreleri için, rejenerasyon çözeltisini 30 saniyelik bir temas süresi ve dakikada 30 mikrolitrelik bir akış hızı ile glisin hidroklorik aside ayarlayın, ardından ileri'ye tıklayın.
Örnekler iletişim kutusunda peptitlerin adlarını, moleküler ağırlıklarını ve konsantrasyonlarını girin, ardından ileri'ye tıklayın. Raf konumu diyaloğunda, seyreltilmiş peptitleri, bir ila 100 mikromolar arasında çeşitli konsantrasyonlara sahip ayrı ayrı 120 mikrolitrelik numuneler olarak raf üzerinde belirlenen konumlara atayın. Rafı çıkar'a tıklayın ve tüm şişeleri yerleştirin.
Daha sonra, ileri'ye tıklayın ve ardından çalıştırma protokolünü hazırla iletişim kutusunda başlat'a tıklayın. Bir dosya adı girin ve kaydet'i tıklayın. Şimdi yazılımda, başlat menüsüne tıklayın ve bir değerleme seçin.
Dosyayı açın, ardından açılır seçim menüsünden, msRBP4, mutant msRBPR2 ve msSTRA6 peptitlerinin ilişkilendirme ve ayrışma fazları için referans hücresi boş çıkarılmış aktif sensörgramı analiz etmek için FC-2.1'i seçin. Ardından, açılır Kinetik veya Benzeşim düğmesine tıklayın ve yüzeye bağlı öğesini seçin. Eğrileri seç iletişim kutusunda, tablodaki sütunu dahil et seçeneğini işaretleyin ve ileri'ye tıklayın.
Şimdi veri seçme iletişim kutusuna gidin, boş çıkarılmış sensorgramları görüntüleyin. Kinetik ve Benzeşim'e tıklayın. Varsayılan parametreleri koruyun ve eğri uydurma için sığdır'ı tıklayın.
Denge ayrışma sabiti Kd, ilişkilendirme oranı Ka veya Kon ve ayrışma oranı Kd veya Koff için rapor sekmesini inceleyin. Kinetik veri sensörgramını metin sekmesinde sınırlı biçimde kaydedin ve değerleri grafikleri çizmek için kullanın.
