Başlamak için, ötenazi yapılmış farenin göz kürelerini enüklee edin ve gözleri buz gibi soğuk bir tamponda homojenize edin. Homojenatı 16.000 G'de dört santigrat derecede 15 dakika santrifüjleyin. Suda çözünür proteinler ve diğer kirleticileri içeren süpernatanı atın.
Daha sonra, peletlenmiş zar ve zar proteinlerini, dönen bir platform üzerinde dört santigrat derecede bir saat boyunca bir tampon içinde yeniden süspanse edin ve çözündürün. Daha sonra, yeniden çözünmüş membran fraksiyonunu dört santigrat derecede 16.000 G'de bir saat santrifüjleyin. Süpernatanı 30 ila 50 mikrolitre Rho1D4 antikor boncukları ve boş immünoglobulin G antikor boncukları ile iki ayrı bağımsız numunede karıştırın ve dönen bir platform üzerinde dört santigrat derecede bir saat inkübe edin.
Manyetik bir stand kullanarak, boncukları toplayarak aşağı çekmeyi ayırın. Süpernatanı atın ve boncukları Bis-tris propan, sodyum klorür ve N-dodesil-beta-D-maltosit içeren yüksek ve düşük tuz tamponu ile yıkayın. Rodopsin proteinini serbest bırakmak için, boncukları, verilen bileşimin 65 mikrolitrelik bir tamponu ile oda sıcaklığında beş ila 10 dakika inkübe edin.
Daha sonra, iki milimetre açıklığa ve 10 milimetre yol uzunluğuna sahip dikdörtgen bir alt mikro 50 mikrolitre kuvars arşın kullanarak, bir spektrofotometre ile hızlı bir tarama ayarında 200 nanometreden 800 nanometreye kadar elüatı absorbans için analiz edin. Kaliteyi doğrulamak ve belirlemek için elüatı bir dakika boyunca parlak ışığa maruz bırakın. Ardından absorbans ölçümünü tekrarlayın.
Boş absorbansı çıkarın ve analiz edilen emici spektrumların oranını hesaplayın. Ardından boş çıkarılmış emici spektrumları çizin ve serbest opsin değerini hesaplayın. Daha sonra, Beer-Lambert yasasını kullanarak, rodopsin konsantrasyonunu hesaplayın, ardından ligandsız opsin konsantrasyonunu hesaplayın ve apo-opsin ve ligandsız opsin için konsantrasyon farkını miktar ve yüzde olarak tahmin edin.
