Başlamak için, triglisin çözeltisini 60 santigrat derecede inkübe edin. Dondurucudan üç RPA pelet şeridi tüpünü çıkarın. Beyaz peletleri çıkarmak için şerit tüplerini laboratuvar tezgahına hafifçe vurun.
Üç peleti de 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın, A. Şerit tüplerinde kalan RPA tozunu durulamak için 25 mikrolitre nükleaz içermeyen su pipetleyin. Durulama solüsyonunu yeni bir 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpü B'ye aktarın.Ardından, 10 mikrolitre 0.57 molar triglisin solüsyonu ve 10 mikrolitre primer karışımını ana karışım tüpüne ekleyin B. Ardından, beş kez RPA tamponunun 28,4 mikrolitresini ana karışım tüpüne ekleyin B. Birden çok kez güçlü bir şekilde vurarak veya sallayarak iyice karıştırın.
Tüp A'da toplanan peletleri ana karışım tüpü B'ye aktarın ve tüpü ters çevirin veya karıştırmak için tüpün altına parmağınızla birkaç kez vurun. Çözeltinin homojen ve monofazik görünüp görünmediğini gözlemleyin. Tüpü buzun üzerine yerleştirin.
Daha sonra ana karışım tüpüne 0.71 mikrolitre ters transkriptaz ve 2.84 mikrolitre RNase H ekleyin. Ana karışım tüpünü birçok kez hafifçe yukarı ve aşağı vurun veya ters çevirin. Tüpü buzun üzerine yerleştirmeden önce kısa bir süre aşağı döndürün.
Şimdi, ana karışım çözeltisinin 8.4 mikrolitresini önceden soğutulmuş 10 mililitrelik 1.5 mililitrelik tüplere ayırın ve tüpleri buzun üzerine yerleştirin. Alıntılamadan sonra, tüpleri liyofilizasyona hazırlamak için sıvı nitrojene batırılmış metal bir rafa yerleştirin. Dondurarak kurutucuda toplayıcı ve raf sıcaklıklarını kontrol edin.
Şimdi, metal raftaki açık tüpleri bir temizleme beyaz kağıdı ile örtün. Metal rafı açık tüplerle birlikte dondurarak kurutma rafına yerleştirin ve raf kapağını kapatın. Ardından, istediğiniz programı seçin ve Başlat'a basın.
İkincil kurutma adımından 30 dakika sonra durdur düğmesine basın. Vakum tahliye vanasını açarak basıncı boşaltın. Rafı raftan çıkardıktan sonra tüpleri hemen kapatın.
