Yazarlar Tracey J. Lamb verilen İmmünoloji ve Aşılar ve NIH Yeni Yenilikçisi Ödülü (1DP2AI112242-01) için Çocuk Merkezi aracılığıyla finansman kabul. Yazarlar ayrıca rad1 S. cömert katkılarından dolayı Natalya P. Degtyareva teşekkür cerevisiae.

<ol>
	<li>Edwards-Ingram, L., Gitsham, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotypic+and+physiological+characterization+of+Saccharomyces+boulardii,+the+probiotic+strain+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Genotypic and physiological characterization of Saccharomyces boulardii, the probiotic strain of Saccharomyces cerevisiae.</a> Applied and environmental microbiology. 73 (8), 2458-2467 (2007).</li><li>Hudson, L. E., Fasken, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Heterologous+Protein+Expression+by+Genetically+Engineered+Probiotic+Yeast+Saccharomyces+boulardii.">Functional Heterologous Protein Expression by Genetically Engineered Probiotic Yeast Saccharomyces boulardii.</a> PloS one. 9 (11), 1-12 (2014).</li><li>Guthrie, C., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Enzymology, Volume 149: Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology. , (1991).</li><li>DiCarlo, J. E., Norville, J. E., Mali, P., Rios, X., Aach, J., Church, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+in+Saccharomyces+cerevisiae+using+CRISPR-Cas+systems.">Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems.</a> Nucleic acids research. 41 (7), 4336-4343 (2013).</li><li>Sander, J. D., Joung, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas+systems+for+editing,+regulating+and+targeting+genomes.">CRISPR-Cas systems for editing, regulating and targeting genomes.</a> Nature biotechnology. 32 (4), 347-355 (2014).</li><li>Lorenz, M. C., Muir, R. S., Lim, E., McElver, J., Weber, S. C., Heitman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+disruption+with+PCR+products+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Gene disruption with PCR products in Saccharomyces cerevisiae.</a> Gene. 158, 113-117 (1995).</li><li>Hamedi, H., Misaghi, A., Modarressi, M. H., Salehi, T. Z., Khorasanizadeh, D., Khalaj, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+Uracil+Auxotroph+Strain+of+the+Probiotic+Yeast+Saccharomyces+boulardii+as+a+Host+for+the+Recombinant+Protein+Production.">Generation of a Uracil Auxotroph Strain of the Probiotic Yeast Saccharomyces boulardii as a Host for the Recombinant Protein Production.</a> Avicenna Journal of Medical Biotechnology. 5 (1), 29-34 (2013).</li><li>Hinnen, A., Hicks, J. B., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+yeast.">Transformation of yeast.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 75 (4), 1929-1933 (1978).</li><li>Hashimoto, H., Morikawa, H., Yamada, K., Kimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+transformation+of+intact+yeast+cells+by+electroinjection+of+plasmid+DNA.">A novel method for transformation of intact yeast cells by electroinjection of plasmid DNA.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 21, 336-339 (1985).</li><li>Becker, D., Guarente, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+transformation+of+yeast+by+electroporation.">High-efficiency transformation of yeast by electroporation.</a> Methods in Enzymology, Volume 149: Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology. , 182-187 (1991).</li><li>Benatuil, L., Perez, J. M., Belk, J., Hsieh, C. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+yeast+transformation+method+for+the+generation+of+very+large+human+antibody+libraries.">An improved yeast transformation method for the generation of very large human antibody libraries.</a> Protein engineering, design &amp; selection : PEDS. 23 (4), 155-159 (2010).</li><li>Ito, H., Fukuda, Y., Murata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+intact+yeast+cells+treated+with+alkali+cations.">Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations.</a> Journal of Bacteriology. 153 (1), 166-168 (1983).</li><li>Kawai, S., Hashimoto, W., Murata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+Saccharomyces+cerevisiae+and+other+fungi:+methods+and+possible+underlying+mechanism.">Transformation of Saccharomyces cerevisiae and other fungi: methods and possible underlying mechanism.</a> Bioengineered bugs. 1 (6), 395-403 (2010).</li><li>Zheng, H. Z., Liu, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+transformation+process+studied+by+fluorescence+labeling+technique.">Yeast transformation process studied by fluorescence labeling technique.</a> Bioconjugate Chemistry. 16, 250-254 (2005).</li><li>Gietz, R. D., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+transformation+of+yeast.">Genetic transformation of yeast.</a> BioTechniques. 30 (4), 816-831 (2001).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ELISA+Method.+.">The ELISA Method. .</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2015).</li><li>Gallagher, S., Chakavarti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoblot+analysis.">Immunoblot analysis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (16), (2008).</li><li>Horn, C. C., Kimball, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+Can't+Rodents+Vomit?+A+Comparative+Behavioral,+Anatomical,+and+Physiological+Study.">Why Can't Rodents Vomit? A Comparative Behavioral, Anatomical, and Physiological Study.</a> PLoS ONE. 8 (4), (2013).</li><li>Hoggatt, A. F., Hoggatt, J., Honerlaw, M., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+spoonful+of+sugar+helps+the+medicine+go+down:+a+novel+technique+to+improve+oral+gavage+in+mice.">A spoonful of sugar helps the medicine go down: a novel technique to improve oral gavage in mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 49 (3), 329-334 (2010).</li><li>Johnson, M., Shayne, C. G., Kemper, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rat.">The rat.</a> Animal Models in Toxicology. , 50-193 (2006).</li><li>Brown, A. P., Dinger, N., Levine, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+produced+by+gavage+administration+in+the+rat.">Stress produced by gavage administration in the rat.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 39, 17-21 (2000).</li><li>Jacoby, R., Fox, J., Davisson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+diseases+of+mice.">Biology and diseases of mice.</a> Laboratory animal medicine. , 35-133 (2002).</li><li>Schulz, O., Pabst, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+sampling+in+the+small+intestine.">Antigen sampling in the small intestine.</a> Trends in immunology. 34 (4), 155-161 (2013).</li><li>McDole, J. R., Wheeler, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Goblet+cells+deliver+luminal+antigen+to+CD103++dendritic+cells+in+the+small+intestine.">Goblet cells deliver luminal antigen to CD103+ dendritic cells in the small intestine.</a> Nature. 483 (7389), 345-349 (2012).</li><li>Farache, J., Koren, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luminal+bacteria+recruit+CD103++dendritic+cells+into+the+intestinal+epithelium+to+sample+bacterial+antigens+for+presentation.">Luminal bacteria recruit CD103+ dendritic cells into the intestinal epithelium to sample bacterial antigens for presentation.</a> Immunity. 38 (3), 581-595 (2013).</li><li>Burke, D., Dawson, D., Stearns, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. , (2000).</li><li>Boeke, J. D., LaCroute, F., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+positive+selection+for+mutants+lacking+orotidine-5'-phosphate+decarboxylase+activity+in+yeast:+5-fluoro-orotic+acid+resistance.">A positive selection for mutants lacking orotidine-5'-phosphate decarboxylase activity in yeast: 5-fluoro-orotic acid resistance.</a> Molecular &amp; general genetics : MGG. 197 (2), 345-346 (1984).</li><li>Chattoo, B. B., Sherman, F., Azubalis, D. A., Fjellstedt, T. A., Mehnert, D., Ogur, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+lys2+mutants+of+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae+by+the+utilization+of+alpha-aminoadipate.">Selection of lys2 mutants of the yeast Saccharomyces cerevisiae by the utilization of alpha-aminoadipate.</a> Genetics. 93, 51-65 (1979).</li><li>Toyn, J. H., Gunyuzlu, P. L., White, W. H., La Thompson, ., Hollis, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+counterselection+for+the+tryptophan+pathway+in+yeast:+5-fluoroanthranilic+acid+resistance.">A counterselection for the tryptophan pathway in yeast: 5-fluoroanthranilic acid resistance.</a> Yeast. 16 (6), 553-560 (2000).</li><li>Singh, A., Sherman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+physiological+characterization+of+met15+mutants+of+Saccharomyces+cerevisiae:+a+selective+system+for+forward+and+reverse+mutations.">Genetic and physiological characterization of met15 mutants of Saccharomyces cerevisiae: a selective system for forward and reverse mutations.</a> Genetics. 81, 75-97 (1975).</li><li>Singh, A., Sherman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+and+relationships+of+mercury+resistant+mutants+and+methionine+auxotrophs+of+yeast.">Characteristics and relationships of mercury resistant mutants and methionine auxotrophs of yeast.</a> Journal of Bacteriology. 118 (3), 911-918 (1974).</li><li>McCoy, S. L., Hausman, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+DNA+binding+to+cell-surfaces+by+flow+cytometry.">Quantification of DNA binding to cell-surfaces by flow cytometry.</a> Journal of Immunological Methods. 241, 141-146 (2000).</li><li>Gietz, R. D., Schiestl, R. H., Willems, A. R., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+transformation+of+intact+yeast+cells+by+the+LiAc/SS-DNA/PEG+procedure.">Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure.</a> Yeast. 11, 355-360 (1995).</li><li>Zhang, Z., Chisti, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid+stability+in+recombinant+saccharomyces+cerevisiae.">Plasmid stability in recombinant saccharomyces cerevisiae.</a> Science. 14 (4), 401-435 (1996).</li><li>Lorang, J. M., Tuori, R. P., Martinez, J. P., Sawyer, T. L., Redman, R. S., Rollins, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+Fluorescent+Protein+Is+Lighting+Up+Fungal+Biology.">Green Fluorescent Protein Is Lighting Up Fungal Biology.</a> Applied and Environmental Microbiology. 67 (5), 1987-1994 (2001).</li><li>Thompson, J. R., Register, E., Curotto, J., Kurtz, M., Kelly, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+protocol+for+the+preparation+of+yeast+cells+for+transformation+by+electroporation.">An improved protocol for the preparation of yeast cells for transformation by electroporation.</a> Yeast. 14, 565-571 (1998).</li><li>Damsch, S., Eichenbaum, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gavage-related+reflux+in+rats:+identification,+pathogenesis,+and+toxicological+implications+(review).">Gavage-related reflux in rats: identification, pathogenesis, and toxicological implications (review).</a> Toxicologic pathology. 39, 348-360 (2011).</li><li>Desai, M., Labhasetwar, V., Amidon, G., Levy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+uptake+of+biodegradable+nanoparticles:+effect+of+particle+size.">Gastrointestinal uptake of biodegradable nanoparticles: effect of particle size.</a> Pharma. 13 (12), (1994).</li><li>Shakweh, M., Ponchel, G., Fattal, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+uptake+by+Peyer's+patches:+a+pathway+for+drug+and+vaccine+delivery.">Particle uptake by Peyer's patches: a pathway for drug and vaccine delivery.</a> Expert opinion on drug delivery. 1 (1), (2004).</li><li>Szymanski, E. P., Kerscher, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Budding+yeast+protein+extraction+and+purification+for+the+study+of+function,+interactions,+and+post-translational+modifications.">Budding yeast protein extraction and purification for the study of function, interactions, and post-translational modifications.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (80), e50921 (2013).</li><li>Hashimoto, S., Ogura, M., Aritomi, K., Hoshida, H., Nishizawa, Y., Akada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Auxotrophic+Mutants+of+Diploid+Industrial+Yeast+Strains+after+UV+Mutagenesis.">Isolation of Auxotrophic Mutants of Diploid Industrial Yeast Strains after UV Mutagenesis.</a> Applied and environmental microbiology. 71 (1), 312-319 (2005).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Birlikte, protokoller burada bağırsak heterolog terapötik protein teslimat için geliştirilmesi ve okzotrofik probiyotik maya suşları testi için gerekli temel adımları açıklar. Bu manipülasyon ve rekombinant probiyotik maya testi herhangi bir bireysel laboratuvar şu anda aşina olmayabilir hangi ile teknikleri ve kaynakları gerektirir. Çok sayıda daha önceki çalışmalar çok maya fare türü için de, yukarıda protokolleri açıklanmasına rağmen Böylece, bu yöntemler, yazarların bilgisi detaylı, birleşik bir şekilde sunulmamıştır gerekir. Ayrıca, bu el yazması daha az yaygın olarak kullanılan laboratuvar maya suşları daha karakterizedir probiyotik maya genetik manipülasyon için geçerli standart protokoller adapte önem vermektedir. ve dönüşüm (Bölüm 2) (Bölüm 1 tartışılan) hem de mutasyon için birçok adım gibi diploid manipülasyon, probiyotik maya isolat için optimize edilmiş olmalıdıres. Bu makale ayrıca, hayvan taşıma (bölüm 3) ve ince bağırsak Peyer bağışıklık dokularda (bölüm 4) diseksiyonu ile ilişkili potansiyel tuzaklar anlatılır. Birçok endüstriyel ve klinik olarak anlamlı maya kökleri, büyük ölçekli genetik manipülasyon hemen adapte değildir gibi, tür pahalı antibiyotiksiz büyütüldü ve seçilebilir oksotropik mutantlar olarak suşlarını meydana getirmek üzere gerekli olmaktadır. UV mutagenez auxotrophic genlerin 7,41 hızlı nonspesifik mutasyon sağlar böyle bir yaklaşımdır. Hayatta kalma eğrileri kolay mutantların taranması için uygun dozu belirlemek için (Şekil 1 ve 2) üretilebilir. Bununla birlikte, bu yaklaşım, büyüme ya da maya suşu için diğer özelliklerini etkileyebilir, hedef mutasyonlar dışı uyarma riskini taşımaktadır. Hedefli tırnakları yerine PCR yapıları veya CRISPR / Cas9 sistemi kullanılarak elde edilebilir. Daha sonraki tarama veya seçimMutantların (Şekil 3) oksotrofık ​​maya tanımlanmasına izin verir. 5-FOA ortamına kaplama ile seçim kullanımı olup, örneğin, hala fonksiyonel bir URA3 okzotrofik genini içeren bir maya hızlı elimine eder. Mümkün olduğunda, bu seçim yaklaşımı oluşturulan tüm kolonilerin analizi gerektiren bir ekrana, tercih olabilir. seçimi veya tarama biriyle, ancak auxotrophic durumunu onaylamak için seçici ortama bireysel maya kolonilerinin tekrarlanan çizgiler gerçekleştirmek için çok önemlidir. Oluşturulan mutantların Dönüşüm farklı protokoller yoluyla gerçekleştirilebilir. Her ne kadar LiOAc dönüşüm özellikle, en sık kullanılan laboratuar S., birçok maya suşunun transformasyonu etkilidir cerevisiae suşları, örneğin elektroporasyon gibi alternatif protokoller diğer maya daha verimli (Şekil 4) ile birlikte izole dönüşebilir. Her yeni suş USI test edilmelidirBirden fazla protokol ng dönüşüm için uygun koşulları belirlemek için. Inkübasyon süreleri ve DNA konsantrasyonu değiştirilmesi, örneğin, genel olarak dönüşüm etkinliğini etkileyebilir ve her bir suş 33 için test edilmiş ve optimize edilmesi gerekmektedir. Ağızdan sonda ile doğrudan bağışıklık dokular daha sonra maya ve heterolog protein için analiz edilebilir sıçangil gastrointestinal sistem, bu rekombinant maya olarak kontrollü dozlarda sağlamaya imkan verir. Uygun ağızdan sonda tekniği (Şekil 6) hayvan rahatsızlığı en aza indirmek ve deneysel hassasiyetini arttırmak için kritik öneme sahiptir. Ayrıca, Peyer yamaları bağırsaktan rekombinant maya alımını değerlendirmek için temel alanlardır. immün doku Bu kümeler, antijen örnekleme ve mukozal bağışıklık tepkilerinin önemli yerlerdir. çapı maya 3-6 mikron dahil olmak üzere büyük antijenler, ga geçmek için Peyer M hücreleri tarafından ele alınması büyük olasılıklastrointestinal epitel ve bağışıklık hücreleri ile etkileşime girer. Yama yerine bağırsak lümeni veya lamina propriya toplanır daha (Şekil 7) içinden sadece hücreler sağlamak için Peyer yamaları diseksiyon dikkat edilmelidir. Bundan başka adımlar da geri maya (Şekil 8) uygun bir ifade heterolog proteinin fonksiyonunu değerlendirmek için diseksiyon aşağıdaki alınmalıdır. bira mayası parçalarının ve immunoblotting toplam proteinin hazırlanması protein ifadesini değerlendirmek için, bir standart bir yöntemdir; Ancak, bu yaklaşım protein katlanması ve işlevi ile ilgili bilgi vermemektedir. Protein fonksiyonunu değerlendirmek için, maya plazmid kodlayan GFP ile transforme edilmiş ve fonksiyonel GFP (Şekil 5) değerlendirmek için Peyer yamaları sona ermesinden sonra bir flüoresan mikroskop altında analiz edilebilir. Özetle, bu yazının sağa sola adımları kapsayan detaylı deneysel protokollerin birleşik bir dizi sunuyorfare bağırsaklardan probiyotik maya kurtarma auxotrophic mutantların nesil m. geleneksel uzmanlık tek bir alanda girmemektedir protokolleri derleyerek, bu açıklamaları ağızdan ilaç dağıtım vektörleri olarak tasarlanmış probiyotik maya immünolojik tepkiler test ileri çalışmalar kolaylaştıracaktır. Yazarlar bu çalışmada roman, probiyotik tabanlı rekombinant tedavilerin geliştirilmesi için en etkili yaklaşımların önünü tartışmayı teşvik ve test edilen her maya suşu için deneysel yöntemlerin optimizasyonu teşvik umuyoruz.

Probiyotik olarak kullanılan mikroorganizmalar etkili ve ekonomik gastrointestinal heterolog proteinlerin teslim ilginç bir potansiyel araçlardır. Bu organizmalar, henüz 1 kolonize olmayan sindirim kanalından geçişini kalan kontrollü doz sağlayan ve uyuşturucu dile maruz kalma sınırlama yeteneğine sahiptirler. Ayrıca, kolay büyük ölçekte heterolog protein üretmek için bu organizmaların mühendislik becerisi olanağına sentetik dağıtım parçacıkları ekonomik bir alternatif oluşturur. En son 2 boulardii&#39;nin probiyotik maya Saccharomyces Okzotrofik suşu kullanılarak ortaya Ancak, böyle bir yaklaşım geliştirilmesi, maya ve moleküler biyoloji hayvanlara yönelik teknikler ve immünolojik yöntemler kadar geleneksel olarak, belirli bir çalışma içinde birleştirilmemiş laboratuvar teknikleri, bilgi gerektirir. Burada tarif edilen bireysel işlemler kendilerini yeni değildir Böylece rağmenLaboratuar protokolleri, bu yazının amacı sıçangil gastrointestinal ilaç verme araçları olarak probiyotik maya deneysel test için gerekli tekniklere birleşik giriş sunmaktır. Sağlanan için gerekli protokollerin bir derleme: kolayca genetik manipüle edilebilir maya auxotrophic mutant suşlar 1) nesil; maya kültürlerinin 2) dönüşümü, heterolog proteini ifade etmek üzere; oral gavaj yoluyla bağırsak rekombinant maya 3) uygulama; onların heterolog protein ifade kemirgen bağırsak ve değerlendirme gelen canlı rekombinant probiyotik maya ve 4) kurtarma. Çok sayıda pozitif ve negatif seçim yöntemleri maya türleri manipülasyonu için mevcut olmakla beraber İlk olarak, bu tür Okzotrofik işaretleyiciler kullanılarak negatif seçim etkinliği ve maya dönüştürülmüş ve seçilebilir kolaylığına artırmaktadır. co antibiyotik kullanan transformantların pozitif seçimi,ntrast önemli ölçüde maya manipülasyon maliyetini arttırır. Ayrıca, antibiyotik içeren katı ortam üzerinde maya seçimi üzerinden sentetik damla katı ortam (yayınlanmamış gözlemler) hakkında oksotropik maya seçimine göre dönüştürülmemiş arka kolonilerin artan büyümesi için izin verir. Okzotrofik maya temel amino asitler ya da urasil sentezi için önemli enzimler eksikliği olan suşlarıdır. maya temel metaboliti yoksun medya üzerinden sentetik damla üzerine kaplama olduğunda böylece negatif seçim sağlayarak, eksik metaboliti veya metabolik geni ile takviye Böyle maya sadece büyüyebilir. Bir çok yaygın olarak kullanılan Saccharomyces cerevisiae laboratuar soyları önce aslında oksotropik mutantları 3 bulunmaktadır. Endüstriyel, klinik ve probiyotik maya suşları, ancak, tipik olarak tüm gerekli besinleri sentez yeteneği ile prototropik bulunmaktadır. Bu tür maya daha etkili genetik olarak işlenmesine olanak sağlamak için, oksotrofik genler seçici hedeflenebilirantibiyotiksiz seçilebilir suşlarını meydana getirmek üzere. 6 - okzotrofik işaretleyici gen spesifik hedefleme CRISPR / Cas9 4 hedefleme ile daha yakın homolog rekombinasyon veya dayanarak PCR aracılı gen bozulması ile elde edilebilir. Alternatif olarak, UV mutagenez hızla hatta 7 teknik olarak zordur birden fazla plazmid ile hangi dönüşüm için maya suşları auxotrophic mutantlar üretebilir. PCR hedefleme ve CRISPR / Cas9 başka yerlerde tarif edilmiş olmakla beraber, bu yazının bir negatif seçim yerine Maya transformantlarının pozitif antibiyotik seçimi için sağlayacak oksotropik türleri oluşturmak için, UV mutagenez yaklaşımı anlatan detaylı bir protokoldür bölümünde sunulmuştur. Heterolog bir proteinin oral yoldan uygulanması için böyle bir oksotrofik suşların kullanımı aşağıdaki gerekli bir aşama plazmid DNA ile maya dönüşümdür. evetler ilk başarılı dönüşümü yana1978 8 Saccharomyces cerevisiae için bildirilen t sferoplastlar, çok sayıda değişiklik verimliliğini artırmak ve maya genetik olarak modifiye edilebilir kolaylığına karakterize edilmiştir. S. DNA&#39;nın başarılı transformasyonu için elektroporasyon kullanımı cerevisiae 1985 9&#39;da tarif edilmiştir ve o zamandan beri ozmotik destek hücreleri 10-1 M sorbitol kuluçkalama eklenerek geliştirilmiştir. Elektroporasyon verimi, ayrıca maya türleri ve şekil, hücre sayısı ve büyüme fazı elektroporasyon hacmi, alan şiddeti, ve spesifik tamponlar 11 bağlıdır gösterilmiştir. Özel bir ekipman gerektirir esas olarak Ito ve ark., 12 tarafından tarif edilen lityum asetat (LiOAc) dönüşümü, en yaygın olarak kullanılan transformasyon protokolleri arasında yer almaktadır. İlave analizler, hücreler mid-log fazında toplandığı zaman LiOAc maya dönüşüm verimliliği büyük ölçüde arttırdığını göstermiştirbüyüme ve ısı 42 ° C ve 12 polietilen glikol (PEG) ve DNA&#39;nın mevcudiyetinde şok. PEG ile bütün dokunulmamış maya inkübasyonu muhtemelen hücre membranına DNA eki geliştirerek ve zar 13 diğer etkileri ile, etkin bir dönüşüm için gereklidir. Lityum kendisi de sağlam hücreler 14 geçirgenliğini arttırır. En laboratuvar S. rağmen cerevisiae suşları kolay LiOAc dönüşüm 3 kullanılarak transforme edilebilir, diğer maya türleri daha etkili bir şekilde bir alternatif protokoller kullanılarak transforme edilebilir. Pichia pastoris, örneğin, en verimli şekilde dönüştürülmüş yerine LiOAc dönüşüm 13 kıyasla- elektroporasyon üzerinden gerçekleştirilir. Bu önemlidir, bu nedenle, çok sayıda test genetik bir uncharacterized maya suşu değiştirmeye çalışırken ve dönüşüm yöntemleri kuluçka dönemleri ve reaktif konsantrasyonları optimize etmek. Bu el yazması, böylece LiOAc tr hem açıklaroksotropik mutan ve vahşi tipli S. transformasyonu için teknikleri ansformation ve elektroporasyon boulardii. İlgilenen okuyucular maya dönüşüm, alternatif protokoller ve eylem 13,15 olası mekanizmaların daha tartışmaların evrim kapsamlı açıklamaları için son değerlendirme yönlendirilir. Plazmid kolaylıkla fark edilebilir bir proteini kodlayan maya transformasyonu uygun bir ifade ile heterolog protein işlevini sağlamak üzere alt test için, ayrıca gereklidir. Sayısız farklı proteinler terapötik çalışma nihai amaç ve immunoblotting, ELISA ve diğer teknikler ile protein tespiti için kullanılabilir antikorlar olarak seçilebilir. Bu teknikler için protokoller iyice başka 16,17 tarif edilmiştir, ve standart eğri ile karşılaştırma ile dönüştürülmüş maya heterolog protein üretimi seviyesini tespit etmek için kullanılabilir. amaçlarla gösteri ve göstermek içinMaya biyolojide çok yaygın olarak kullanılan protein başarılı üretim bu Eser floresan mikroskobu kullanılarak takip eden şekilde tespit eder plazmid kodlayan yeşil floresan proteini (GFP) ile dönüşüm gösterir. Üçüncü ve dördüncü de tarif edildiği gibi bir heterolog protein, uygun bir şekilde yönetilmesini ve gastrointestinal dokularda bu mikroorganizmaların tespit edilmesi, ifade probiyotik organizmalar üretimine kadar önemli bir. Oral gavaj yoluyla rekombinant maya uygulanması doğrudan C57BL / 6 fareleri, doğal olarak 18 kusma aciz olan mide içine maya kontrollü miktarların verilmesi için izin verir. Ancak, yanlış bir hayvan taşıma ve sonda özofagus hasarı ve perforasyon, mide delinmesi, trakea idaresi ve aspirasyon pnömonisi 19,20 yol açabilir. Kötü tekniği ve deneyimsizliği ayrıca fare bağışıklık tepkilerinin ve deneysel resu değişkenliği artırabiliroral sonda 21,22 üzerine hayvan strese atfedilen lt. Uygun teknikle Uygulama böylece sadece hayvan rahatsızlık zayıflatabilir, ama aynı zamanda deneysel sonuçların doğruluğunu artırabilir. Bu yazıda tarif ve rekombinant maya kontrollü dozlarda tatbikat için hayvanlara yönelik ve bir mide sondası gösterir. Son olarak, maya ve heterolog proteinin varlığı için lenfoid dokular analiz ederek yeniden birleştirici maya başarılı bir şekilde iletilmesini teyit etmek için hayati önem taşımaktadır. En kolay ve tahmin maya varlığı için incelenebilir mide-immün doku Peyer yamaları. Peyer yamaları mukozal immün yanıt indüksiyon 23 anahtar siteleri ince bağırsakta boyunca ikincil lenfoid organlardır. lümenden antijenler microfold yoluyla transcellularly epitelde (M) hücre aktarılır ve içine maruz bırakılması ve böylece, Peyer yamaları salınırsunan hücrelerin D antijen lümen içeriği intestinal. Bağırsak epiteli üzerinde parçacık alımı da goblet hücreleri tarafından elde edilebilir, ancak bu hücrelerin yalnızca sürebilir parçacıkların çapı 24 daha az 0.02 um gösterilmiştir. Transepithelial dendritler CD103 + dendritik hücrelerin (DC) de 25 lümen intestinal küçük parçacıkları almak uzanan; Ancak, CD103 + DC&#39;ler bakteri daha büyük parçacıkları sürebilir gösteren herhangi bir rapor bulunamamıştır. Böylece bütün probiyotik maya, çapı 3-6 mm arasında ortalama boyutu, E hücreleri tarafından alınır ve Peyer yamaları aktarılacak muhtemeldir. Burada tarif edilen bu prosedür, aynı zamanda kolayca probiyotik bakteri alımını değerlendirmek için adapte edilebilir, ancak, toplama ve uygun bir yeniden birleştirici maya için Peyer yamaları elenmesi için bir protokoldür. Özet olarak, verilmesi için rekombinant probiyotik maya değerlendirmekbağırsak tetkik, tedavi proteinler, hayvan taşıma ve immünoloji moleküler biyoloji kapsayan laboratuvar teknikleri ustalığı gerektirir. 1 burada sunulmuştur protokolleri) kolay olumsuz antibiyotiksiz seçilebilir üretimi ve oksotropik maya suşunun taranması, 2), alternatif protokoller maya dönüşümü ve heterolog protein ekspresyonunu sağlamak için, 3), uygun hayvansal işleme teknikleri ve oral gavaj gösteriler rekombinant maya mide teslimat ve Peyer diseksiyon için 4) protokolleri ve yaşayabilir rekombinant maya ve fonksiyonel heterolog protein için tarama. Birlikte, bu protokoller üretimi ve mide bağırsak heterolog terapötik proteini sunma yeteneğine sahip bir probiyotik maya suşunun denemeden geçirilmesine izin verecektir.

<table><tbody><tr><td>SmartSpec 3000 Spectrophotometer</td><td>BioRad</td><td>170-2501</td><td>Example of spectrophotometer for determining cell concentration and OD&lt;sub&gt;600&lt;/sub&gt; of yeast cultures</td></tr><tr><td>New Brunswick Roller Drum</td><td>Eppendorf</td><td>M1053-4004</td><td>Example of roller drum for yeast culture incubation</td></tr><tr><td>UV Stratalinker 2400</td><td>Stratagene</td><td>400075-03</td><td>Example stratalinker</td></tr><tr><td>Stuart Colony Counter SC6PLUS</td><td>11983044</td><td>Fisher Scientific</td><td>Plate stand with magnification records colony count upon sensing pressure from pen</td></tr><tr><td>Scienceware Colony Counter&amp;nbsp;</td><td>F378620002</td><td>Bel-Art Scienceware</td><td>Hand held colony counter pen</td></tr><tr><td>Replica plating device</td><td>Fisherbrand</td><td>09-718-1</td><td>Example of replica plating stand and pads&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Velveteen squares</td><td>Fisherbrand</td><td>09-718-2</td><td></td></tr><tr><td>L shaped sterile cell spreaders&amp;nbsp;</td><td>Fisherbrand</td><td>14665230</td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonucleic acid, single stranded from salmon testes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D7656-1ML</td><td>Example carrier DNA for yeast LiOAc transformation</td></tr><tr><td>Gavage needles</td><td>Braintree Scientific</td><td>N-PK&amp;nbsp;002</td><td>For mice 15-20 g, the suggested needle is a 22 gauge (1.25 mm ball), 1 in long, straight reusable gavage needle. For mice weighing greater than 20&amp;nbsp;g, 20 gauge or larger straight or curved gavage needles may be used</td></tr><tr><td>1 ml sterile slip-tip disposable tuberculin syringe</td><td>Becton Dickinson</td><td>BD 309659</td><td></td></tr><tr><td>Blunt forceps such as Electron Microscopy Sciences 7&quot; (178 mm) serrated tip, broad grip forceps</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>77937-28</td><td>Example of blunt forceps needed for dissection&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Straight and curved dissection scissors</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72966-02 and 72966-03</td><td>Examples of scissors needed for dissection</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Life technologies</td><td>12440053</td><td></td></tr></tbody></table>

transformation of probiotic yeast and their recovery from gastrointestinal immune tissues following oral gavage in mice

Development of recombinant oral therapy would allow for more direct targeting of the mucosal immune system and improve the ability to combat gastrointestinal disorders. Adapting probiotic yeast in particular for this approach carries several advantages. These strains have not only the potential to synthesize a wide variety of complex heterologous proteins but are also capable of surviving and protecting those proteins during transit through the intestine. Critically, however, this approach requires expertise in many diverse laboratory techniques not typically used in tandem. Furthermore, although individual protocols for yeast transformation are well characterized for commonly used laboratory strains, emphasis is placed here on alternative approaches and the importance of optimizing transformation for less well characterized probiotic strains. Detailing these methods will help facilitate discussion as to the best approaches for testing probiotic yeast as oral drug delivery vehicles and indeed serve to advance the development of this novel strategy for gastrointestinal therapy.

UV ışınlaması, aşağıdaki hayatta kalma eğrisi oluşturacak şekilde farklı koloni oluşturan birim (CFU) oluşturabildiği şekilde seyreltildi maya hücrelerinin kaplama gerektirir. Yukarıda açıklandığı gibi toplanan her 500 ul numune yaklaşık 5 x 10 6 hücre ihtiva eder; Bununla birlikte, plaka başına 100&#39;den büyük koloniler doğru ayırt etmek zordur. Seyreltilmemiş örnek yanı sıra ışınlanmış hücrelerin seri 01:10 dilüsyonları böylece Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi CFU, her UV dozunda numaralandırılan edilebilmesini sağlar Kaplama. CFU sayımı, seyreltme faktörü ile çarpılır, ardından toplam sayısına bölünür her bir dozda yüzde hayatta kalma tespit etmek için, her 500 ul numune orijinal ışınlanmış hücreleri. Şekil 2 diploid vahşi tipli S. hesaplanan yüzdesini gösterir boulardii&#39;nin hücreler 0 μJ, 5000 μJ 10.000 μJ, 15.000 μJ 20.000 μJ, 22.500 μJ, 25.000 hayatta kalabilirμJ, 35.000 μJ ve 50.000 μJ. Bu veriler,% 50 hayatta kalma karşılık gelen dozu bulmak için kullanılabilir açık bir eğri oluşturmaktadır. UV dozu ve maya hücrelerinin ışınlama seçilmesinden sonra, bu fonksiyonel oksotropik marker geninin olmaması onaylamak ekran mutant koloniler için kritiktir. Bir seçim yönteminin kullanımı, 1.2.3.1 açıklanmıştır ve Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, önemli ölçüde fenotipi teyit etkinliğini arttırır. Sağlam URA3 toksin 5-FU 5-FOA dönüştürülmesi yararlanır URA3 seçme bir örnek gösterilmektedir. TRP1;, benzer yaklaşımlar LYS2 ve LYS5 için kullanılabilir ve MET2 ve MET15, bu mutasyonlar için seçim etkinliğini artırmaktadır. Bakım tarama sırasında bireysel koloniler seçmek için alınmalıdır. YDP ve 5-FOA değil urasil üzerinde mutant kolonilerinin istikrarlı büyüme - plakalar işaret değerleriauxotrophic fenotip es. Şekil 4 vahşi tip S. dönüşüm verimliliğini gösterir Yaygın olarak kullanılan bir laboratuvar S&#39;ye boulardii (Sb) göreli LiOAc (LiOAc) ve elektroporasyon (Elektro) tekniklerini birlikte kullanarak cerevisiae suşu (Sc). LiOAc dönüşümü S. için çok verimli olmasına rağmen cerevisiae, S. dönüşüm verimliliği boulardii ölçüde. elektroporasyon kullanılarak geliştirilmiş dönüştürülmüş maya uygun protein ifadesini analiz bir örnek yöntemi olarak floresan mikroskopi 5 gösterileri kullanımını Şekil edilir. Aydınlık (A) ve flöresanlı (B) görüntüleri S. gösterilmektedir cerevisiae dönüştürülmüş maya heterolog proteinin işlevsel ifadesini gösteren bir URA3 plazmid kodlayan GFP ile transforme edildi. Hücreler daha iyi görselleştirme (kaplamaz 2 5 ul konkanavalin A kaplı lamelleri kullanarak hareketsiz olabilirmg / her 22 x 22 mm lamel ve kuru hava üzerine suda ml stok çözelti). Şekil 6A, oral gavaj hemen önce gerçekleştirilen bir C57BL / 6 fare gösterir. El fare herhangi bir yönde kafa taşımak mümkün olmadığı sıkıca böyle fare sırt ve boyun kavrıyor. Bu tutma gavaj iğnesi doğru yerleştirilmesini ve fare gavaj iğnesi yutar sonra doku hasarının azalma riski. Şekil 6B, tutulan gavaj iğnesi gösterir sağlar. Şekil 7&#39;de gösterildiği gibi, kuluçka süresinin ardından, kurban fare ince bağırsak dikkatle çevre dokulardan ayrı alay gerekmektedir. Bu durum, manipülasyon çevreleyen bir toplama olmadan Peyer yamaları ve yamalar temiz diseksiyon kolay saptanmasına olanak lamina propria. Son olarak, Şekil 8, Peyer yamaları canlı maya CFU tipik bir iyileşme olduğunu gösterir. </p&gt; <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> Çözümler </td><td> Maya Medya ve Tabaklar </td><td> dönüşüm Reaktifler </td></tr><tr><td> Polietilen glikol (PEG)% 50: </td><td> YPD: </td><td> TE / LiOAc: </td></tr><tr><td> 250 g PEG 3350 </td><td> 20 g pepton </td><td> 50 mi 10x TE </td></tr><tr><td> 500 ml steril su </td><td> 20 g dekstroz </td><td> 50 mi 10x (1 M) LiOAc </td></tr><tr><td> filtre sterilize </td><td> 10 g maya özütü </td><td> 400 ml steril su </td></tr><tr><td></td><td> 1 L su </td><td> filtre sterilize </td></tr><tr><td></td><td> Otoklav </td><td></td></tr><tr><td> TE 10x: </td><td> YPD plakalar: </td><td> PEG / TE / LiOAc: </td></tr><tr><td> 100 mM Tris </td><td> 20 g pepton </td><td> 400 ml% 50 PEG </td></tr><tr><td> 10 mM EDTA </td><td> 20 g dekstroz </td><td> 50 mi 10x TE </td></tr><tr><td> 7.5 ve filtre ile sterilize pH </td><td> 20 gr ağar </td><td> 50 mi 10x (1 M) LiOAc </td></tr><tr><td></td><td> 10 g maya özütü </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 1 L su </td><td></td></tr><tr><td></td><td> Otoklav </td><td></td></tr><tr><td> % 20 glükoz: </td><td> Urasil - seçici medya </td><td> Taşıyıcı DNA (SS DNA): </td></tr><tr><td> 200 g dekstroz </td><td> urasil yoksun 2 g, amino asit karışımı </td><td> -20 ° C&#39;de saklayın ve ipliklerini eritmek için 100 ° C&#39;de 1-2 dakika boyunca ısı kullanımı ve buz üzerinde saklamak için önceden </td></tr><tr><td> 1 L su </td><td> amino asitler içermeyen 6.7 g maya azot baz </td><td></td></tr><tr><td> filtre sterilize </td><td> 1 L su </td><td></td></tr> &lt;tr&gt; <td></td><td> otoklav veya steril filtreleme ile sterilize </td><td></td></tr><tr><td></td><td> Kullanmadan önce% 20 glikoz 01:10 ekle </td><td></td></tr><tr><td> % 50 gliserol: </td><td> Urasil - plakaları: </td><td> Elektroporasyon tampon maddesi: </td></tr><tr><td> 500 ml gliserol </td><td> 250 ml&#39;lik bir şişe içinde: </td><td> 1 M sorbitol </td></tr><tr><td> 500 ml su </td><td> urasil yoksun 2 g, amino asit karışımı </td><td> 1 mM CaCl2 </td></tr><tr><td> Otoklav </td><td> amino asitler içermeyen 6.7 g maya azot baz </td><td> damıtılmış su ile doldurun </td></tr><tr><td></td><td> 150 ml su </td><td> 4 ° C&#39;de otoklav ve mağaza </td></tr><tr><td></td><td> 2 L&#39;lik bir şişede: </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 20 gr ağar </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 750 ml su </td><td></td></tr><tr&gt; <td></td><td> Otoklav şişeler ayrıca, daha sonra 100 ml% 20 glukoz ile karıştırın </td><td></td></tr><tr><td> tam IMDM </td><td> 5-FOA + plakaları: </td><td> LiOAc / DTT </td></tr><tr><td> 500 mi Iscove Modifiye Dulbecco Ortam </td><td> 2 L&#39;lik bir şişede Otoklav: </td><td> 0.1 M LiOAc </td></tr><tr><td> 5 ml penisilin streptomisin glutamin 100x </td><td> 20 gr ağar </td><td> 10 mM DTT </td></tr><tr><td> 500 ul 2-merkaptoetanol </td><td> 750 ml su </td><td></td></tr><tr><td> % 10 ısı ile inaktive edilmiş fetal büyükbaş hayvan serumu </td><td> mix: </td><td></td></tr><tr><td> 2.5 ml sodyum piruvat, 100 mM </td><td> amino asitler içermeyen 6.7 g maya azot baz </td><td></td></tr><tr><td></td><td> urasil olmayan 2g amino asit karışımı </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 150 ml ılık su </td><td></td&gt; </tr><tr><td></td><td> Soğuyunca ekleyin: </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 0.05 gr urasil tozu </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 1 g 5-FOA </td><td></td></tr><tr><td></td><td> Karıştırın ve filtre sterilize </td><td></td></tr><tr><td></td><td> otoklavlanmış agar çözeltisi ekle </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 100 ml% 20 glukoz ile karıştırın </td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1. Reaktifler listesi. Açıklanan bu yazının protokoller için kullanılan çözümlerin, maya medya ve plakalar ve dönüşüm tamponların her yapım için gerekli reaktif vardır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53453/53453fig1.jpg" /> Şekil 1. Maya kolonileri YPD ortamına yetiştirilen. Örnek YPD plaka p birim (CFU) oluşturan canlı koloni gösterenUV ışınlaması sonrası robiotic maya. Hücreler seri bireysel CFU ayırt ve sayılabilir şekilde sulandırıldı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53453/53453fig2.jpg" /> Diploit probiyotik maya için Şekil 2. sağkalım eğrisi. Yaşayabilir S. Sayısı Toplam kaplama hücrelerinin yüzdesi olarak boulardii&#39;nin CFU UV ışıması (düz çizgi), her doz için μJ çizilmiştir. dikey kırmızı çizgi bu maya suşu% 50 hayatta kalma karşılık gelen doz μJ UV gösterir. UV mutasyon gelen hasarı onarmak edemez bir rad1 S. cerevisiae mutant, bir kontrol (kesikli çizgi). Olarak gösterilen <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig2large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. &lt;</a>/ A&gt; <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53453/53453fig3.jpg" /> Şekil URA3 3. Onay - UV fenotipi YDP, urasil üzerinde hücreleri ışınlanmış - ve 5-FOA plakaları tek tek UV mutant koloniler hücreler steril bir kürdan ucu kullanılarak toplanan ve yavaşça YPD, urasil karşısında çizikler vardı -., Ve 5. -FOA plakalar. Hücreler ilk önce, yeni bir kürdan ikinci hat üzerinden geçecek ve tek tek hücreler ayrılana kadar hücreleri yaymaya devam etmek için kullanıldı, iki dik kesişme hatları sıyrılmıştır. Gerçek bir URA3 - mutantı (MUT), ancak urasil yokluğunda, YPD ortamı ve 5-FOA mevcudiyetinde artmaktadır. Kontrol ura3 - S. cerevisiae (URA3 -) ve URA3 + </<html> sup&gt; S. boulardii (URA3 +) karşılaştırma için gösterilmiştir ve. maya medya doğru hazırlanması onaylamak için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig3large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53453/53453fig4.jpg" /> Saccharomyces suşları Şekil 4. Dönüşüm Verimliliği. Yabani tip S. boulardii&#39;nin (SB) ve laboratuar S. cerevisiae suşu (Sc) tarif LiOAc (LiOAc) ve elektroporasyon (Elektro) protokollerini kullanarak dönüştürülmüştür. ortalama CFU bir kanamisin direnç işaretçiyi kodlayan plazmidin ug başına elde edilen sonuçlar çizilir. Çubukları, ortalamanın standart hatasını gösteren hata çubukları ile yinelenen deneylerin ortalama göstermektedir.es / ftp_upload / 53453 / 53453fig4large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/53453/53453fig5.jpg" /> Dönüştürülmüş Maya tarafından 5. Fonksiyonel Protein İfade Şekil. S. boş plazmid (A) ve plazmid kodlayan GFP (B) ile transforme cerevisiae floresan mikroskop kullanılarak analiz edilmiştir. GFP plazmid ile dönüştürülen maya hücrelerinin floresan fonksiyonel GFP başarılı üretimini gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/53453/53453fig6.jpg" /> Oral sonda bir C57BL / 6 fare Şekil 6. Uygun kullanım. Fare düzenlenen tightl olduğunuo kadar küçük parmağın altında sıkışmış kuyruk ile baskın olmayan el y hiçbir hareket (A) mümkündür. sonda iğne ağız çatı boyunca yutak içine sokulur. Fare piston (B) depresif olduğu gibi Daha sonra çözelti. Mide girmek için izin gavaj iğne ampulü yutmak için izin verilir <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig6large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/53453/53453fig7.jpg" /> Peyer yamaları Şekil 7. hazırlanması ve diseksiyon. Ince bağırsak oklar Peyer yamaları birkaç işaret ile, diğer iç organlar ve doku uzak disseke olarak gösterilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig7large.jpg" target="_blank">Daha büyük bir versi görmek için buraya tıklayınız</a>bu rakamın üzerinde. <img alt="Şekil 8," src="/files/ftp_upload/53453/53453fig8.jpg" /> Şekil 8. Peyer Yamalar gelen Maya Kurtarma. S. zorla ağız yolundan verilmiştir bir fare canlı diseksiyon, homojenizasyon sonra tespit CFU ve toplam Peyer hücrelerinin kaplama bir örnek boulardii. Hücreler, YPD maya ortamı üzerine ekildi ve 2 gün boyunca 30 ° C&#39;de inkübe edilmiştir. Fare başına kazanılan CFU tipik verim az 10&#39;dur <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53453/53453fig8large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice at JoVE.com

Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice

Geliştirmek dönüşümü, yönetmek ve probiyotik maya Saccharomyces boulardii heterolog protein ifadesini test etmek için kullanılabilecek tekniklerin birleşik bir açıklama burada sunulmuştur.

Farelerde oral sonda ardından Probiyotik Maya Dönüşümü ve Gastrointestinal Bağışıklık Dokular Onların Kurtarma

Development of recombinant oral therapy would allow for more direct targeting of the mucosal immune system and improve the ability to combat ...

transformation-probiotic-yeast-their-recovery-from-gastrointestinal

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

12.3K Görüntüleme.  Emory University School of Medicine.  Geliştirmek dönüşümü, yönetmek ve probiyotik maya Saccharomyces boulardii heterolog protein ifadesini test etmek için kullanılabilecek tekniklerin birleşik bir açıklama burada sunulmuştur. 

Video: Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice

Genetic Engineering of an Unconventional Yeast for Renewable Biofuel and Biochemical Production

Yarrowia lipolytica is a non-pathogenic, dimorphic and strictly aerobic yeast species. Owing to its distinctive physiological features and metabolic characteristics, this unconventional yeast is not only a good model for the study of the fundamental nature of fungal differentiation but is also a promising microbial platform for biochemical production and various biotechnological applications, which require extensive genetic manipulations. However, genetic manipulations of Y. lipolytica have been limited due to the lack of an efficient and stable genetic transformation system as well as very high rates of non-homologous recombination that can be mainly attributed to the KU70 gene. Here, we report an easy and rapid protocol for the efficient genetic transformation and for gene deletion in Y. lipolytica Po1g. First, a protocol for the efficient transformation of exogenous DNA into Y. lipolytica Po1g was established. Second, to achieve the enhanced double-crossover homologous recombination rate for further deletion of target genes, the KU70 gene was deleted by transforming a disruption cassette carrying 1 kb homology arms. Third, to demonstrate the enhanced gene deletion efficiency after deletion of the KU70 gene, we individually deleted 11 target genes encoding alcohol dehydrogenase and alcohol oxidase using the same procedures on the KU70 knockout platform strain. It was observed that the rate of precise homologous recombination increased substantially from less than 0.5% for deletion of the KU70 gene in Po1g to 33%-71% for the single gene deletion of the 11 target genes in Po1g KU70&#916;. A replicative plasmid carrying the hygromycin B resistance marker and the Cre/LoxP system was constructed, and the selection marker gene in the yeast knockout strains was eventually removed by expression of Cre recombinase to facilitate multiple rounds of targeted genetic manipulations. The resulting single-gene deletion mutants have potential applications in biofuel and biochemical production.

We herein report methods on the molecular genetic manipulation of the Yarrowia lipolytica Po1g strain for improved gene deletion efficiency. The resulting engineered Y. lipolytica strains have potential applications in biofuel and biochemical production.

Yenilenebilir Biyoyakıt ve Biyokimyasal Üretim için bir Sıradışı Maya Genetik Mühendisliği

Yarrowia lipolytica is a non-pathogenic, dimorphic and strictly aerobic yeast species. Owing to its distinctive physiological features and metabolic ...

Genetik

A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System

Humanized mice (hu-mice) that feature a functional human immune system have fundamentally changed the study of human pathogens and disease. They can be used to model diseases that are otherwise difficult or impossible to study in humans or other animal models. The gut microbiome can have a profound impact on human health and disease. However, the murine gut microbiome is very different than the one found in humans. &#160;There is a need for improved pre-clinical hu-mice models that have an engrafted human gut microbiome. Therefore, we created double hu-mice that feature both a human immune system and stable human-like gut microbiome. NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice are one of the best animals for humanization due to their high level of immunodeficiency. However, germ-free NSG mice, and various other important germ-free mice models are not currently commercially available. Further, many research settings do not have access to gnotobiotic facilities, and working under gnotobiotic conditions can often be expensive and time consuming. Importantly, germ-free mice have several immune deficiencies that exist even after the engraftment of microbes. Therefore, we developed a protocol that does not require germ-free animals or gnotobiotic facilities. To generate double hu-mice, NSG mice were treated with radiation prior to surgery to create bone-marrow, liver, thymus-humanized (hu-BLT) mice. The mice were then treated with broad spectrum antibiotics to deplete the pre-existing murine gut microbiome. After antibiotic treatment, the mice were given fecal transplants with healthy human donor samples via oral gavage. Double hu-BLT mice had unique 16S rRNA gene profiles based on the individual human donor sample that was transplanted. Importantly, the transplanted human-like microbiome was stable in the double hu-BLT mice for the duration of the study up to 14.5 weeks post-transplant.

We describe a novel method for generating double humanized BLT-mice that feature a functional human immune system and a stable engrafted human-like gut microbiome. This protocol can be followed without the need for germ-free mice or gnotobiotic facilities.

A Double Humanized BLT-fareler Modeli Kararlı Bir İnsan-Benzeri Gut Mikrobiyom ve İnsan Bağışıklık Sistemi featuring

Humanized mice (hu-mice) that feature a functional human immune system have fundamentally changed the study of human pathogens and disease. They can be ...

Biyokimya

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult mouse models to neonatal diseases is limited. To better understand disease progression, host responses and long-term impact of interventions in neonates, a neonatal mouse model likely is a better fit. The sparse use of neonatal mouse models can in part be attributed to the technical difficulties of working with these small animals. A neonatal mouse model was developed to determine the effects of probiotic administration in early life and to specifically assess the ability to establish colonization in the newborn mouse intestinal tract. Specifically, to assess probiotic colonization in the neonatal mouse, Lactobacillus plantarum (LP) was delivered directly into the neonatal mouse gastrointestinal tract. To this end, LP was administered to mice by feeding through intra-esophageal (IE) gavage. A highly reproducible method was developed to standardize the process of IE gavage that allows an accurate administration of probiotic dosages while minimizing trauma, an aspect particularly important given the fragility of newborn mice. Limitations of this process include possibilities of esophageal irritation or damage and aspiration if gavaged incorrectly. This approach represents an improvement on current practices because IE gavage into the distal esophagus reduces the chances of aspiration. Following gavage, the colonization profile of the probiotic was traced using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) of the extracted intestinal DNA with LP specific primers. Different litter settings and cage management techniques were used to assess the potential for colonization-spread. The protocol details the intricacies of IE neonatal mouse gavage and subsequent colonization quantification with LP.

This study details the process of gavaging precise amounts of probiotics to neonatal mice. The experimental set-up was optimized to include but is not limited to probiotic dosing, methods of administration, and quantification of bacteria in the intestines.

Probiyotik çalışmalar yenidoğan farelerde sonda ile besleme kullanarak

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for maintaining local and systemic homeostasis; changes to gut microbiota composition (dysbiosis) associate with a wide array of human diseases. Methods for dissecting host-microbiota interactions encompass an inherent tradeoff among preservation of physiological tissue structure (when using in vivo animal models) and the level of control over the experiment factors (as in simple in vitro cell culture systems). To address this tradeoff, Yissachar et al. recently developed an intestinal organ culture system. The system preserves a naive colon tissue construction and cellular mechanisms and it also permits tight experimental control, facilitating experimentations that cannot be readily performed in vivo. It is optimal for dissecting short-term responses of various gut components (such as epithelial, immunological and neuronal elements) to luminal perturbations (including anaerobic or aerobic microbes, whole microbiota samples from mice or humans, drugs and metabolites). Here, we present a detailed description of an optimized protocol for organ culture of multiple gut fragments using a custom-made gut culture device. Host responses to luminal perturbations can be visualized by immunofluorescence staining of tissue sections or whole-mount tissue fragments, fluorescence in-situ hybridization (FISH), or time-lapse imaging. This system supports a wide array of readouts, including next-generation sequencing, flow cytometry, and various cellular and biochemical assays. Overall, this three-dimensional organ culture system supports the culture of large, intact intestinal tissues and has broad applications for high-resolution analysis and visualization of host-microbiota interactions in the local gut environment.

This article presents a unique method for analyzing host-microbiome interactions using a novel gut organ culture system for ex vivo experiments.

Konak-Mikrobiyota Etkileşimlerini Analiz Etmek için Bağırsak Bağırsak Organ Kültürü Sistemi

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted considerable attention. Accumulating evidence suggests that dysbiotic microbiota plays an active role in triggering or worsening the inflammatory process in IBD and that fecal microbiota transplantation (FMT) is an attractive therapeutic strategy since transferring a healthy microbiota to IBD patient could restore the appropriate host-microbiota communication. However, the molecular mechanisms are unclear, and the efficacy of FMT has not been very well established. Thus, further studies in animal models of IBD are necessary. In this method, we applied FMT from wild-type C57BL/6J mice to IL-10 deficient mice, a widely used mouse model of colitis. The study elaborates on collecting fecal pellets from the donor mice, making the fecal solution/suspension, administering the fecal solution, and monitoring the disease. We found that FMT significantly mitigated the cardiac impairment in IL-10 knockout mice, underlining its therapeutic potential for IBD management.

The interaction of genetic susceptibility, mucosal immunity, and intestinal microecological environment is involved in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). In this study, we applied fecal microbiota transplantation to IL-10 deficient mice and investigated its impact on colonic inflammation and heart function.

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun İnterlökin 10 Eksikliği Olan Fare Modelinde Terapötik Değerlendirmesi

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Murine Fecal Isolation and Microbiota Transplantation

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal microbiota transplantation (FMT) is a valuable approach to delineating a direct role of the total microbiota or isolated species in disease pathophysiology. It is a safe treatment option for patients with recurrent Clostridium difficile infection. Preclinical studies demonstrate that manipulating the gut microbiota is a useful tool to study the mechanistic link between dysbiosis and disease. Fecal microbiota transplantation may help elucidate novel gut microbiota-targeted therapeutics for the management and treatment of cardiometabolic disease. Despite a high success rate in rodents, there remains translational changes associated with the transplantation. The goal here is to provide guidance in studying the effects of gut microbiome in experimental cardiovascular disease. In this study, a detailed protocol for the collection, handling, processing, and transplantation of fecal microbiota in murine studies is described. The collection and processing steps are described for both human and rodent donors. Lastly, we describe using a combination of the Swiss-rolling and immunostaining techniques to assess gut-specific morphology and integrity changes in cardiovascular disease and related gut microbiota mechanisms.

The goal here is to outline a protocol to investigate the mechanisms of dysbiosis in cardiovascular disease. This paper discusses how to aseptically collect and transplant murine fecal samples, isolate intestines, and use the "Swiss-roll" method, followed by immunostaining techniques to interrogate changes in the gastrointestinal tract.

Murin Fekal İzolasyonu ve Mikrobiyota Transplantasyonu

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal ...

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of the specific role of individuals, defined or complex groups of microorganisms in host response. Traditionally bred and reared in flexible-film or semi-rigid isolators, germ-free mouse husbandry and experimental manipulation are costly and require numerous trained staff and a large space footprint in animal housing facilities. The IsoPositive caging system allows for experimental manipulation of germ-free mice in individual, hermetically-sealed, positive-pressure isolator cages (isocages), reducing cost and enabling greater flexibility in experimental manipulations. 
Here, a protocol is described for transferring germ-free mice from breeding isolators to isocages and subsequent fecal transfer from human donor stool into mice to create stable long-term gut "humanized" mice for future studies. The materials and preparation needed for the utilization of the isocage system are described, including the use of chlorine-dioxide sterilant chemical sterilant to clean cages, supplies, equipment, and personal protective equipment. The methods for confirming the germ-free status of transferred mice and how to determine contamination in the caging system are discussed. The procedure for husbandry, including bedding, food, and water supply, is further discussed. The protocol for human fecal slurry preparation and gavage into germ-free mice to create gut "humanized" mice, along with stool collection to monitor the microbial community composition of these mice, are described. An experiment illustrates that two weeks post-human fecal transplant allows for stable colonization of donor microbiota in the murine hosts, enabling subsequent experimental usage. Furthermore, the collection of humanized mouse feces in viability preservation media, enabling use in further functional experiments, is described. Overall, these methods allow for the safe and effective establishment of humanized mouse communities in experimental gnotobiotic cages for further manipulation.

This protocol describes the best practices for germ-free mouse transfer to and housing in experimental single-cage isolators (isocages) while maintaining sterile conditions. Methods for fecal transplant into germ-free mice and the collection of viable bacteria from these gut "humanized" mice for further applications are discussed.

Mikropsuz Farelere İnsan Dışkı Nakli için Biyodışlama İzoPozitif Kafes Deneyinin Hazırlanması ve Sürdürülmesi

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the biological function of intestinal bacteria as a whole or at the species level. Several different FMT methods have been published. Here, we present an FMT protocol that successfully depletes gut microbiota in a matter of days, followed by transplantation of fecal microbiota from fresh or frozen donor intestinal contents to conventional mice. Real time-PCR is applied to test the efficacy of bacterial depletion. Sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) is then applied to test the relative abundance and identity of gut microbiota in recipient mice. We also present a flow cytometry-based detection method of immunoglobulin A (IgA)-coated bacteria in the gut.

<meta charset="utf8"></head><body>Fekal Mikrobiyota Transplantasyonu ve Bağırsakta IgA Kaplı Bakteri Prevalansının Saptanması

We established an efficient way to deplete intestinal bacteria in three days, and subsequently transplant fecal microbiota via gavage of fecal fluid prepared from fresh or frozen intestinal contents in mice. We also present an optimized method to detect the frequency of IgA-coated bacteria in the gut.

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonu ve Bağırsakta IgA Kaplı Bakteri Prevalansının Saptanması

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the ...

Biyoloji

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in alleviating colitis remain undefined. Most analysis methods rely on limited diversity and abundance of gut microorganisms. Therefore, observational studies cannot establish causation. In this study, we applied antibiotic-induced pseudo-germ-free mice to investigate the role of gut microbiota in regulating the probiotic effects of Bacillus&#160;cereus (B. cereus)&#160;on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. This process allows for evaluating the bidirectional regulating effect of B. cereus&#160;supplementation on health and provides stable and reproducible results. Here, the detailed protocols for B. cereus cultivation, gavage operation, stool collection, and antibiotic clearance treatment on colitis mice are provided. The optimization methods are also applicable for other chronic inflammatory-associated disorders. The results showed that B. cereus administration decreased body weight loss, colon length shortening, disease activity index, and histopathological scores. However, treatment with antibiotics suppressed the positive effect of B. cereus on colitis. These results indicate that gut microbiota are needed for the alleviating effects of B. cereus on colitis. Therefore, exploring the beneficial effects of probiotics in this research is a promising approach for developing novel treatment strategies for alleviating the symptoms of chronic inflammatory-associated disorders.

<meta charset="utf8"></head><body>Bacillus cereus Uygulamasının Kolit Üzerindeki Hafifletici Etkilerinin Bağırsak Mikrobiyota Modülasyonu ile Araştırılması

Here, we present a protocol to establish the antibiotic-induced pseudo-germ-free dextran sulfate sodium-induced colitis mouse model to investigate the role of gut microbiota in regulating the positive effects of Bacillus cereus on colitis.

Farelerde oral sonda ardından Probiyotik Maya Dönüşümü ve Gastrointestinal Bağışıklık Dokular Onların Kurtarma

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Yenilenebilir Biyoyakıt ve Biyokimyasal Üretim için bir Sıradışı Maya Genetik Mühendisliği

A Double Humanized BLT-fareler Modeli Kararlı Bir İnsan-Benzeri Gut Mikrobiyom ve İnsan Bağışıklık Sistemi featuring

Probiyotik çalışmalar yenidoğan farelerde sonda ile besleme kullanarak

Konak-Mikrobiyota Etkileşimlerini Analiz Etmek için Bağırsak Bağırsak Organ Kültürü Sistemi

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun İnterlökin 10 Eksikliği Olan Fare Modelinde Terapötik Değerlendirmesi

Murin Fekal İzolasyonu ve Mikrobiyota Transplantasyonu

Mikropsuz Farelere İnsan Dışkı Nakli için Biyodışlama İzoPozitif Kafes Deneyinin Hazırlanması ve Sürdürülmesi

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonu ve Bağırsakta IgA Kaplı Bakteri Prevalansının Saptanması

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonu ve Bağırsakta IgA Kaplı Bakteri Prevalansının Saptanması

Bacillus cereus Uygulamasının Kolit Üzerindeki Hafifletici Etkilerinin Bağırsak Mikrobiyota Modülasyonu ile Araştırılması