Yazarlar Dr Robert Dotson Tulane Üniversitesi bölümü hücre ve moleküler biyoloji el yazması düzenleme'onun yardım ve Dr James Bollinger, Tulane Üniversitesi Kimya bölümü onun yardım için yardım kabul Kütle spektrometresi protokol tasarımı ile. Yazarlar ayrıca, Tulane Üniversitesi bölümü hücre ve moleküler biyoloji ve kimya Tulane Üniversitesi bölümü verdikleri destek ve uzay ve ekipman kullanımı için kabul. Bu eser Tulane Üniversitesi Okulu bilim ve mühendislik C. Anderson için bir tütün ürünü yasal bilim araştırma bursu tarafından desteklenmiştir.

1. cihazın montajı
<ol><li>100 Buchner şişesi (şekil 1, #4) çelik yüzük için stand ve Kalsiyum klorür bir kurutucu hizmet etmek için 50 g ile doldurarak bir vakum bindirme oluşturma mL güvenli. Şişeye bir kauçuk ile delikli tıpa ile mühür, stoper kavşak parafin film ile sarın ve bir pipet delikten çalıştırın.</li>
	<li>Vinil tüp kullanarak, pipet tıpa t-kavşak hortum bağlayıcıyı uzanan bağlayın.</li>
	<li>Vinil tüp kullanarak, iki darbe ölçer (şekil 1, #2 ve #3) birbirine bağlanmak ve ikinci Darbe ölçer çıkışını t-kavşak hortum konektörüne bağlayın.</li>
	<li>Vinil tüp kullanarak, inhalasyon bağlantı noktası (şekil 1, #1) olarak hizmet etmek için ilk darbe ölçer giriş bağlayınız.</li>
	<li>Vinil tüp, kullanarak bağlan Buchner şişeye yan kol bir hava akımı regülatörü (şekil 1, #7) giriş portuna ve bir vakum pompası hava akımı Regülatöre çıkış bağlantı noktası.</li>
	<li>Devre şeması şekil 2Aiçinde göre bir araya getirin.</li>
	<li>BS1 mikroişlemci (şekil 1, #6) için PBASIC program SVL.bs1 (şekil 2B, https://github.com/ChastainAnderson/SVL da mevcuttur) seri bir adaptör ve üretici yazılımı aracılığıyla yüklemek.</li>
	<li>Yer 510 dişli Bankası (şekil 1 #8) bir halka ayağa kelepçe.</li>
	<li>Vinil tüp kullanarak, solenoid valfi (şekil 1, #5) t-kavşak hortum bağlayıcı ücretsiz ucunu bağlayın. Not: Cihazın tam ve işlem için hazır, onlar sıkı hava vardır ve hortum kelepçeleri ve gerektiği gibi vakum gres uygulayın emin olmak için tüm eklemleri kontrol.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56709/56709fig2.jpg"> Şekil 2: Elektrik şematik ve PBASIC kod. Şekil 2A görüntüler normalde açık solenoid Vana etkinleştirmek için gereken elektrik devresi montaj için elektrik şematik ve Isıtma bobin düğmesinin elektronik sigara aktif (510 dişli elektronik Sigara tank temel). Elektrik parametreleri Isıtma bobin (P: güç; R: direnç; ve ı: akım) tahmin ediliyor ve ampirik bir multimetre sonrası derleme ile doğrulanmış olmalıdır. Şekil 2B şekil 2A (Ayrıca https://github.com/ChastainAnderson/SVL kullanılabilir) devrede kontrol için gerekli PBASIC zamanlama programı görüntüler. Zamanlama sabitler SVT & IPT (#5 & #6) ms birimleridir ve bir etkinleştirme süresinin 2 saniye ve 28 devre dışı kaldığında sağlamak için küme s. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56709/56709fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
2. örnek depolama ve hazırlama
<ol><li>Tüm açılmamış geleneksel ve elektronik sigara örnekleri karanlık oda sıcaklığında hava geçirmez plastik torbalarda saklayın.</li>
	<li>Bir kez açıldı, örnekleri, 4 ºC, aşırı nem absorbe kağıt havlu ile hava geçirmez plastik torbalarda saklayın.</li>
	<li>Oda sıcaklığında humidor ~ %60 nem, tüm örnekleri için en az 30 dakika kullanmak için önceden önceden equilibrate.</li>
</ol>3. genel işleyişi sigara duman/elektronik sigara Aerosol ayıklama aygıtı
<ol><li>Her e-sigara cartomizer/tank pre-vaping bir analitik denge kullanarak kitle belirlemek. Öncesi/sonrası sonrası vaping ağırlık farkı uygun dozaj belirlemek için kullanılır. Not: 3R4F başvuru sigara 0.7 mg nikotin içeren varsayılır ve ticari sigara markaları nikotin içeriğini geleneksel analitik yöntemleri13tarafından belirlenebilir.</li>
	<li>Örnek uygulama 1 için birincil darbe ölçer rezervuarı endotel hücre kültür orta 4.3 mL ile doldurulması. Örnek uygulama 2 için aseton ile 5 mL rezervuar doldurun.</li>
	<li>
Elektronik sigara veya geleneksel sigara çıkarılması için hazırlayın:
	<ol>
<li>Geleneksel sigara kullanıyorsanız, filtre etrafında net bant parçası uygulamak ve sigara kağıdı filtre ile birleştiği kolayca görünür bir işareti koymak.</li>
		<li>Bir sigara gibi e-sigara kullanıyorsanız, pil de doludur ve cartomizer sıkı bir şekilde pil için vidalı emin olun.</li>
		<li>Bir elektronik sigara tankı kullanıyorsanız, uygun bir elektronik sigara sıvı hacmi içinde belgili tanımlık tank yüklendiğinden emin olun ve tank 510 dişli Bankası üzerine vida.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Geleneksel ya da elektronik sigara ucu (şekil 1, #1) inhalasyon portuna takın ve bir hortum kelepçesi ile güvenli.</li>
	<li>Vakum pompası açmak.</li>
	<li>Debimetre 1.65 M/dakika 2 saniye içinde 55 mL puf sağlamak için çekmek için ayarlayın.</li>
	<li>Mikrodenetleyici üzerinde açın. Geleneksel sigara kullanıyorsanız, ilk puf üzerinde sigara yak.</li>
	<li>Öngörülen kadar çalışma istenilen konsantrasyonu (parçalar milyon veya % başına ağırlık/hacim) elde edilir.</li>
	<li>
Her e-sigara cartomizer/tank kitle sonra buharlaşma bir analitik denge kullanarak belirleyin. Bu ölçüm kitle tüketilen toplam belirlemek için adım 3.1 geçen ölçüme karşılaştırın. Tüketilen kütle/solvent hacmi konsantrasyonu hesaplayın. Tüketilen nikotin molar konsantrasyonu ürünler arasında normalleştirmek için kullanın.
	<ol>
<li>Yetersiz bir kütle tüketilen varsa, aygıta elektronik sigara dönüp daha fazla tüketmek.</li>
		<li>Yeterli veya aşırı kitle tüketilen, devam edin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. filtrasyon ve depolama
<ol><li>Özü hücre kültürü için kullanılmak üzere, 0,22 µm PES şırınga filtre ile filtre.</li>
	<li>Özler hemen kullanın veya-80 ºC saklayabilirsiniz. Anderson, et al. hazırlıkları kapsamında 8, elektronik sigara aerosol en az iki hafta boyunca istikrarlı olması için gösterilmiştir ve iki yıla kadar dumanı kararlılığını Crooks, et al. kurulmuş olup 13.</li>
</ol>5. cihaz Temizleme
<ol><li>Her çıkarma sonra tüp durulama ve rezervuar % 70 etanol ve önlemek için deiyonize su ile cihazın örnekleri arasında taşımak.</li>
	<li>Durulama, kısaca kurutma hatları yardımcı olmak için hava akımı sağlamak için boş aygıtı çalıştırmak takip.</li>
</ol>6. örnek uygulama 1: Nötr kırmızı alımını hücre canlılığı tahlil
<ol><li>Özü endotel hücre büyüme ortamının 4.3 mL içine yukarıdaki gibi gerçekleştirin.</li>
	<li>Bir gün önce insan göbek damar endotel hücreleri, 1 x 104 hücreleri wellin/100 µL endotel hücre büyüme ortamının yoğunluğu 96 iyi tabak içine tohum.</li>
	<li>Ya 100 µL bir denetim olarak hizmet etmek için taze endotel hücre kültür ortamının veya 75 µL endotel hücre büyüme orta 2 mM tüketilen nikotin konsantrasyon özü (1,4 mg 25 µL ile karışık ile eski endotel hücre kültür orta değiştirerek hücreleri tedavi nikotin 4.3 mL endotel hücre büyüme orta tüketilen) için tedavi olarak hizmet etmek için 500 µM son bir konsantrasyon.</li>
	<li>Her iki sigara duman ve elektronik sigara aerosol bileşenlerin çoğu uçucu olduğundan, bir folyo mühür kuyuları hava geçirmez tutmak için kullanın.</li>
	<li>18-24 h plaka kuluçkaya 37 ° C ve % 5 CO2.</li>
	<li>
Tarafsız kırmızı çözüm boyama hazırlayın:
	<ol>
<li>33 mg 10 mL tamponlu tuz çözeltisi içine tarafsız kırmızı boya çözülerek 100 x nötr kırmızı hisse senedi çözüm oluşturun.</li>
		<li>Kısa bir süre önce kullanma, 1 x nötr kırmızı çözüm boyama oluşturmak için hücre kültürü ortamında hisse senedi çözüm 1: 100 x 100 oranında seyreltin.</li>
		<li>Tarafsız kırmızı çözüm en az 30 dk önce kullanım ve kullanım için 37 ° C'de hemen boyama kuluçkaya. Not: Bazı kristaller kuluçka sırasında çökelti normaldir. Bu kristaller hücre kültür wells uygulamaktan kaçının için özen gösterilmelidir. Gerekirse, bir 22'lik µm filtre tarafsız kırmızı stok ve boyama çözümleri filtre uygulamak için kullanılabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Özü kaldırın ve tarafsız kırmızı çözüm de, en az üç boş kuyular için uygun miktar oluşturmak için aşırı kullanım başına boyama 100 µL ekleyin.</li>
	<li>2-4 h 37 ° C ve % 5 CO2plaka kuluçkaya.</li>
	<li>Tarafsız kırmızı çözüm boyama kaldırmak ve 3 x tarafından PBS batma yıkayın.</li>
	<li>Tarafsız kırmızı geçerli çözüm (%50 deiyonize su, % 49 etanol, % 1 Asetik asit) de-leke.</li>
	<li>En az 10 dk sallayarak ile oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
	<li>540 Absorbans okumak nm.</li>
	<li>Boş wells ortalama değeri çıkarılarak ve boş ayarlanan kontrol iyi değeri ortalama normalleştirme tarafından veri analiz.</li>
</ol>7. örnek uygulama 2: Gaz Kromatografi Kütle spektrometresi
<ol><li>Çıkarma olarak yukarıda içine 5 mL aseton gerçekleştirin.</li>
	<li>~ 100 parça son bir konsantrasyon ulaşmak için aygıtı çalıştırmak milyon (e-sıvı tüketilen/hacmi aseton ağırlığını), örnek.</li>
	<li>Hassas cam şırınga kullanarak, 1 µL GC-MS aygıtı enjektör enjekte. 1:20 oranı ZB-5 sütun aşağıdaki fırın protokolü ile donatılmış bir eşleşmiş gaz Kromatograf/quadrupole Spektrometre sistemi içine split ile 250 ° C'de enjekte: 1 min 50 ° c; 10 ° C/140 ° C min rampa; 20 ° C/min 300 ° C için rampa ve 10 dakikadır tutun.</li>
	<li>Aerosol bileşenlerini tanımlamak için hedef kitaplığı için elde edilen kitle spectra aynı.</li>
</ol>

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Report on the Global Tobacco Epidemic, 2011. , (2011).</li><li>Weaver, S. R., Majeed, B. A., Pechacek, T. F., Nyman, A. L., Gregory, K. R., Eriksen, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electronic+nicotine+delivery+systems+and+other+tobacco+products+among+USA+adults,+2014:+results+from+a+national+survey.">Use of electronic nicotine delivery systems and other tobacco products among USA adults, 2014: results from a national survey.</a> Int. J. Public Health. 61 (2), 177-188 (2016).</li><li>Singh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tobacco+Use+Among+Middle+and+High+School+Students+-+United+States,+2011–2015.">Tobacco Use Among Middle and High School Students - United States, 2011–2015.</a> MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 65 (14), 361-367 (2016).</li><li>Corey, C. G., Ambrose, B. K., Apelberg, B. J., King, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavored+Tobacco+Product+Use+Among+Middle+and+High+School+Students--United+States,+2014.">Flavored Tobacco Product Use Among Middle and High School Students--United States, 2014.</a> MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 64 (38), 1066-1070 (2015).</li><li>Pisinger, C., D&#248;ssing, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+health+effects+of+electronic+cigarettes.">A systematic review of health effects of electronic cigarettes.</a> Prev. Med. 69, 248-260 (2014).</li><li>Callahan-Lyon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+cigarettes:+human+health+effects.">Electronic cigarettes: human health effects.</a> Tob. Control. 23 (Suppl 2), ii36-ii40 (2014).</li><li>Dinakar, C., O'Connor, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Health+Effects+of+Electronic+Cigarettes.">The Health Effects of Electronic Cigarettes.</a> N. Engl. J. Med. 375 (14), 1372-1381 (2016).</li><li>Anderson, C., Majeste, A., Hanus, J., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-cigarette+aerosol+exposure+induces+reactive+oxygen+species,+DNA+damage,+and+cell+death+in+vascular+endothelial+cells.">E-cigarette aerosol exposure induces reactive oxygen species, DNA damage, and cell death in vascular endothelial cells.</a> Toxicol. Sci. Off. J. Soc. Toxicol. , (2016).</li><li>U.S. Department of Health and Human Services. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Health Consequences of Smoking: 50 Years of Progress. A Report of the Surgeon General. , (2014).</li><li>Farsalinos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+Cytotoxic+Potential+of+Cigarette+Smoke+and+Electronic+Cigarette+Vapour+Extract+on+Cultured+Myocardial+Cells.">Comparison of the Cytotoxic Potential of Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Vapour Extract on Cultured Myocardial Cells.</a> Int. J. Environ. Res. Public. Health. 10 (10), 5146-5162 (2013).</li><li>Schweitzer, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+disruptive+proinflammatory+effects+of+nicotine+and+e-cigarette+vapor+exposures.">Endothelial disruptive proinflammatory effects of nicotine and e-cigarette vapor exposures.</a> Am. J. Physiol. - Lung Cell. Mol. Physiol. 309 (2), L175-L187 (2015).</li><li>Putzhammer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vapours+of+US+and+EU+Market+Leader+Electronic+Cigarette+Brands+and+Liquids+Are+Cytotoxic+for+Human+Vascular+Endothelial+Cells.">Vapours of US and EU Market Leader Electronic Cigarette Brands and Liquids Are Cytotoxic for Human Vascular Endothelial Cells.</a> PLOS ONE. 11 (6), e0157337 (2016).</li><li>Crooks, I., Dillon, D. M., Scott, J. K., Ballantyne, M., Meredith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+long+term+storage+on+tobacco+smoke+particulate+matter+in+in+vitro+genotoxicity+and+cytotoxicity+assays.">The effect of long term storage on tobacco smoke particulate matter in in vitro genotoxicity and cytotoxicity assays.</a> Regul. Toxicol. Pharmacol. 65 (2), 196-200 (2013).</li><li>Roemer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mainstream+Smoke+Chemistry+and+in+Vitro+and+In+Vivo+Toxicity+of+the+Reference+Cigarettes+3R4F+and+2R4F.">Mainstream Smoke Chemistry and in Vitro and In Vivo Toxicity of the Reference Cigarettes 3R4F and 2R4F.</a> Beitr. Zur Tab. Contrib. Tob. Res. 25 (1), (2014).</li><li>International Organization for Standards. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ISO 3088:2012 Routine analytical cigarette smoking machine – Definitions and standard conditions. , (2012).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Standard Operating Procedure for Intense Smoking of Cigarettes. , (2012).</li><li>Brown, C. J., Cheng, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+cigarettes:+product+characterisation+and+design+considerations.">Electronic cigarettes: product characterisation and design considerations.</a> Tob. Control. 23 (Suppl 2), ii4-ii10 (2014).</li><li>Cooperation Centre for Scientific Research Relative to Tobacco. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CRM No. 81 - Routine Analytical Machine for E-Cigarette Aerosol Generation and Collection - Definitions and Standard Conditions. , (2015).</li><li>Thorne, D., Adamson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+in+vitro+cigarette+smoke+exposure+systems.">A review of in vitro cigarette smoke exposure systems.</a> Exp. Toxicol. Pathol. 65 (7-8), 1183-1193 (2013).</li><li>Klus, H., Boenke-Nimphius, B., M&#252;ller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+Mainstream+Smoke:+The+Evolution+of+Methods+and+Devices+for+Generation,+Exposure+and+Collection.">Cigarette Mainstream Smoke: The Evolution of Methods and Devices for Generation, Exposure and Collection.</a> Beitr. Zur Tab. Contrib. Tob. Res. 27 (4), (2016).</li><li>Baker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Development+and+Significance+of+Standards+for+Smoking-Machine+Methodology.">The Development and Significance of Standards for Smoking-Machine Methodology.</a> Beitr. Zur Tab. Contrib. Tob. Res. 20 (1), (2014).</li><li>Thorne, D., Crooks, I., Hollings, M., Seymour, A., Meredith, C., Gaca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mutagenic+assessment+of+an+electronic-cigarette+and+reference+cigarette+smoke+using+the+Ames+assay+in+strains+TA98+and+TA100.">The mutagenic assessment of an electronic-cigarette and reference cigarette smoke using the Ames assay in strains TA98 and TA100.</a> Mutat. Res. Toxicol. Environ. Mutagen. 812, 29-38 (2016).</li><li>Thorne, D., Larard, S., Baxter, A., Meredith, C., Ga&#1195;a, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+in+vitro+assessment+of+e-cigarette+and+cigarette+smoke+aerosols+using+the+&#947;H2AX+assay+and+applied+dose+measurements.">The comparative in vitro assessment of e-cigarette and cigarette smoke aerosols using the &#947;H2AX assay and applied dose measurements.</a> Toxicol. Lett. 265, 170-178 (2017).</li><li>Herrington, J. S., Myers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+cigarette+solutions+and+resultant+aerosol+profiles.">Electronic cigarette solutions and resultant aerosol profiles.</a> J. Chromatogr. A. 1418, 192-199 (2015).</li><li>Yu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+cigarettes+induce+DNA+strand+breaks+and+cell+death+independently+of+nicotine+in+cell+lines.">Electronic cigarettes induce DNA strand breaks and cell death independently of nicotine in cell lines.</a> Oral Oncol. 52, 58-65 (2016).</li><li>Ji, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Electronic+Cigarette+Aerosol+and+Its+Induction+of+Oxidative+Stress+Response+in+Oral+Keratinocytes.">Characterization of Electronic Cigarette Aerosol and Its Induction of Oxidative Stress Response in Oral Keratinocytes.</a> PLOS ONE. 11 (5), e0154447 (2016).</li><li>Morgan, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Reactivity+and+Respiratory+Toxicity+of+the+-Diketone+Flavoring+Agents:+2,3-Butanedione,+2,3-Pentanedione,+and+2,3-Hexanedione.">Chemical Reactivity and Respiratory Toxicity of the -Diketone Flavoring Agents: 2,3-Butanedione, 2,3-Pentanedione, and 2,3-Hexanedione.</a> Toxicol. Pathol. 44 (5), 763-783 (2016).</li><li>Cooperation Centre for Scientific Research Relative to Tobacco. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CRM No. 84 - Determination of Glycerin, Propylene Glycol, Water, and Nicotine in the Aerosol of E-Cigarettes by Gas Chromatographic Analysis. , (2017).</li></ol>

Tulane Üniversitesi tarafından yönetilen tütün ürünü yasal bilim araştırma bursu programı Altria müşteri hizmetleri düzenleyici işleri tarafından finanse edilmektedir.

Bu iletişim kuralı en kritik unsurları cihaz temiz başında olduğunu kontrol ettikten ve her çıkarımı bitirmek ve tüm mühürler kadar korunmasını sağlamak bu hava akımı tutarlı kalır. Aygıt düzgün temizlenir değil ise, taşıma riski üzerinde örnekleri arasında. Ayrıca, cihazın zaman sıkıştırılmış aerosol uzun bir süre için kirli yaptı ve kurutulmuş solvent sistem engelleyebilirsiniz. Orada geleneksel sigara ve hava akımı şişirme bir basınç düşüşü olmak metre cihazı Oda h...

Sağlık kuruluşları tarafından yoğun bir çaba rağmen Sigara İçilmeyen1' e atfedilen bu ölümlerin çoğunluğu ile dünya çapında, önlenebilir ölüm önde gelen nedenidir tütün ürün kullanımı kalır. 2003'te pazara girme beri elektronik sigara tütün ürünü kullanıcıları arasında popülaritesi artıyor. Şu anda, elektronik sigara geleneksel sigara arasında Amerikan gençlerinin (~ %5)2 ve orta (% ~ 5.3) ve yüksek okul (~ %16)3arasında en popüler nikotin teslim sistemi için en popüler bir alternatif vardır. Eğer mevcut eğilimler devam, elektronik sigara geleneksel sigara gelecek nesiller için değiştirmek için beklenebilir. Ancak, elektronik sigara kullanımının sağlık sonuçları belirsiz kalır.
Elektronik sigara popülerlik hızla 20133,4' te arttı kadar elektronik sigara araştırmaya ciddi olarak başlatılmadı. O zamandan beri farklı modeller bir dizi onların toksisite soru adresi için istihdam edilmiştir. Ancak, birçok çalışma sonuçlarını çakışıyor ve elektronik sigara genellikle orada geleneksel sigara daha az toksik gibi görünüyor olsa da elektronik sigara sağlık sonuçları geçerli hiçbir birliğine kullanın5, 6 , 7. elektronik sigara damar endotel önemli ölçüde daha az toksik kıyasla, DNA hasarı ve oksidatif stres ve hücre ölüm8 indüksiyon neden yeteneklerini rağmen önceki araştırma gösterir . Ancak, elektronik sigara kullanımının sağlık sonuçları hakkında kesin sonuçlar sürükleyebilirsin önce daha fazla araştırma gereklidir.
Geleneksel sigara önlenebilir damar hastalığı9önde gelen nedenidir gibi işte elektronik sigara vasküler sağlık riski artan bir ilgi10,11,12kullanın. Damar sistemi elektronik sigara etkilerini incelemek amacıyla işletilen Mikrodenetleyici yasaktır/vaping aygıt (şekil 1)8laboratuarımıza geliştirdi. Sulu ya da organik çözücüler ya da geleneksel sigara duman ya da elektronik sigara sprey sıvı özleri üretme yeteneğine sahip bir cihazdır. Hava akımı bir ayarlanabilir hava akışı Regülatörü ve bir PBASIC zamanlama programı kombinasyonu tarafından kontrol edilir gibi cihazın özleri herhangi bir dizi kullanıcı tanımlı protokolü göre oluşturmak için kullanılabilir. Burada biz ayrıntılı olarak montaj ve işletme bu cihaz aynı zamanda iki potansiyel uygulamalar: vitro hücre canlılığı değerlendirme ve Gaz Kromatografi Kütle spektrometresi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56709/56709fig1.jpg"> Şekil 1: yasaktır/Vaping cihaz. Şematik yasaktır/vaping aygıt içinde sigara/sigara elektronik sigara (e-cig) yapılandırma(a)gibi ve tank elektronik sigara yapılandırma (B) fiziksel Meclisi. Bileşen anahtarı: 1) inhalasyon bağlantı noktası; 2) birincil koleksiyonu darbe ölçer; 3) taşma darbe ölçer; 4) Buchner şişesi vakum tuzak; 5) normalde açık solenoid Vana; 6) BS1 Mikrodenetleyici; 7) hava akım regülatörü; 8) 510 elektronik sigara tank baz akıtılan. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56709/56709fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 V AC/DC Wall Mount Adaptor</td>
			<td>Digi-Key</td>
			<td>T1099-P5P-ND</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.2 Ohm Resistors</td>
			<td>Digi-Key</td>
			<td>A105635-ND</td>
			<td>Used in tandem to generate the 4.4 Ohm resistance in Figure 2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>330 Ohm Resistors</td>
			<td>Digi-Key</td>
			<td>330QBK-ND</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>510 Threaded Base</td>
			<td>NJoy</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Recovered by dismantalling a second generation NJoy electronic cigarette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid, Glacial</td>
			<td>Sigma-Aldritch</td>
			<td>A6283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone (Chromatography Grade)</td>
			<td>Sigma-Aldritch</td>
			<td>34850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Stamp Project Board</td>
			<td>Digi-Key</td>
			<td>27112-ND</td>
			<td>This board contains the BS1 Microcontroller, serial adaptor, power switch, and a barrel pin connector for the AC/DC Wall Mount Adaptor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Stamp USB to Serial Adapter</td>
			<td>Digi-Key</td>
			<td>28030-ND</td>
			<td>An optional component to allow the BS1 serial adaptor to communicate through USB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buchner Flask (Vacuum Flask) 250 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10545-854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>S-9783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Vinyl Tubing, 3/8&#34; ID</td>
			<td>Watts</td>
			<td>443064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2 Endothelial Cell Culture Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco-Aaper</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Regulator</td>
			<td>Dwyer</td>
			<td>VFA-23-BV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Chromatograph</td>
			<td>Varian</td>
			<td>450-GC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Syringe, 10 mL</td>
			<td>Sigma-Aldritch</td>
			<td>Z314552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Syringe, 10 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Vacuum Silicon Grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>146355D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hose Clamp</td>
			<td>Precision Brand</td>
			<td>35125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Umbilical Vein Endothelial Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>PCS-100-013&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mass Spectrometer</td>
			<td>Varian</td>
			<td>300-MS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midget Impinger</td>
			<td>Chemglass</td>
			<td>CG-1820-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Red</td>
			<td>Sigma-Aldritch</td>
			<td>N4638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>PM-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Seal Roller</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>MSR0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Seal; Foil</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>276014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring Stand 20&#34;</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>7-G15-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid Valve (normally open)</td>
			<td>US Solid</td>
			<td>USS2-00081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid State Relay</td>
			<td>Digi-Key</td>
			<td>CLA279-ND</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stand Clamp</td>
			<td>Eisco</td>
			<td>CH0688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Filter, PES, 0.22 um</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Through Hole Stopper, Size 6</td>
			<td>VWR</td>
			<td>59581-287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>KNF Neuberger</td>
			<td>N86KTP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a microcontroller operated device for the generation of liquid extracts from conventional cigarette smoke and electronic cigarette aerosol

Elektronik sigara orta ve yüksek okul arasında en popüler tütün ürünüdür ve yetişkinler arasında en popüler alternatif tütün ürünüdür. Yüksek kalite, tekrarlanabilir araştırma sonuçları elektronik sigara kullanımının kamu sağlık sorunları ortaya çıkan ve kanıt işçiliği düzenleyici İlkesi temelinde anlamak için önemlidir. Kağıtları, giderek artan sayıda elektronik sigara komisyonda görüşürken, işte küçük tutarlılık yöntemleri grupları ve sonuçları üzerinde çok az fikir birliği arasında. Burada, geleneksel sigara duman ve elektronik sigara aerosol özleri oluşturmak için kullanılan bir programlanabilir laboratuvar cihaz açıklayın. Bu protokol, ve ve detayları yönergeleri derleme ve işletme dedi aygıt için oluşturulan hulâsa iki örnek uygulamalar içinde kullanımını gösterir: bir vitro hücre canlılığı tahlil ve Gaz Kromatografi Kütle spektrometresi. Bu yöntem geleneksel sigara ve elektronik sigara arasında doğrudan karşılaştırmalar yapmak için bir araç sağlar ve elektronik sigara araştırma içine erişilebilir giriş noktasıdır.

24 saat içinde insan Umbilikal ven maruz kalma geleneksel sigara dumanı özü (CSE) veya elektronik sigara aerosol endotel hücreleri (EAE) özü, önemli bir şey (ÖAM P vs denetimi < 0,001 EAE P vs denetimi; < 0,01; n = 6) hücre canlılığı (şekil 3A) azalma. Özler 2, 2 saniye, dakika başına 55 mL puffs şişirme bir profil ile oluşturulan ve nikotin aygıt tarafından tüketilen temel alınarak molar konsantrasyonu normalleşti...

Watch this Scientific Journal Video about A Microcontroller Operated Device for the Generation of Liquid Extracts from Conventional Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Aerosol at JoVE.com

A Microcontroller Operated Device for the Generation of Liquid Extracts from Conventional Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Aerosol

Burada, geleneksel sigara duman ve elektronik sigara aerosol özleri oluşturmak için kullanılan bir programlanabilir laboratuvar cihaz açıklayın. Bu yöntem geleneksel sigara ve elektronik sigara arasında doğrudan karşılaştırmalar yapmak için yararlı bir araç sağlar ve elektronik sigara araştırma içine erişilebilir giriş noktasıdır.

Sıvı özleri geleneksel sigara duman ve elektronik sigara Aerosol gelen nesil için aygıt mikroişlemci işletilen

Electronic cigarettes are the most popular tobacco product among middle and high schoolers and are the most popular alternative tobacco product among ...

a-microcontroller-operated-device-for-generation-liquid-extracts-from

Research

JoVE Journal

Bioengineering

8.3K Görüntüleme.  Tulane University. Burada, geleneksel sigara duman ve elektronik sigara aerosol özleri oluşturmak için kullanılan bir programlanabilir laboratuvar cihaz açıklayın. Bu yöntem geleneksel sigara ve elektronik sigara arasında doğrudan karşılaştırmalar yapmak için yararlı bir araç sağlar ve elektronik sigara araştırma içine erişilebilir giriş noktasıdır.

Video: A Microcontroller Operated Device for the Generation of Liquid Extracts from Conventional Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Aerosol

A Protocol for Detecting and Scavenging Gas-phase Free Radicals in Mainstream Cigarette Smoke

Cigarette smoking is associated with human cancers. It has been reported that most of the lung cancer deaths are caused by cigarette smoking 5,6,7,12. Although tobacco tars and related products in the particle phase of cigarette smoke are major causes of carcinogenic and mutagenic related diseases, cigarette smoke contains significant amounts of free radicals that are also considered as an important group of carcinogens9,10. Free radicals attack cell constituents by damaging protein structure, lipids and DNA sequences and increase the risks of developing various types of cancers. Inhaled radicals produce adducts that contribute to many of the negative health effects of tobacco smoke in the lung3. Studies have been conducted to reduce free radicals in cigarette smoke to decrease risks of the smoking-induced damage. It has been reported that haemoglobin and heme-containing compounds could partially scavenge nitric oxide, reactive oxidants and carcinogenic volatile nitrosocompounds of cigarette smoke4. A 'bio-filter' consisted of haemoglobin and activated carbon was used to scavenge the free radicals and to remove up to 90% of the free radicals from cigarette smoke14. However, due to the cost-ineffectiveness, it has not been successfully commercialized. Another study showed good scavenging efficiency of shikonin, a component of Chinese herbal medicine8. In the present study, we report a protocol for introducing common natural antioxidant extracts into the cigarette filter for scavenging gas phase free radicals in cigarette smoke and measurement of the scavenge effect on gas phase free radicals in mainstream cigarette smoke (MCS) using spin-trapping Electron Spin Resonance (ESR) Spectroscopy1,2,14. We showed high scavenging capacity of lycopene and grape seed extract which could point to their future application in cigarette filters. An important advantage of these prospective scavengers is that they can be obtained in large quantities from byproducts of tomato or wine industry respectively11,13

Spin-trapping ESR spectroscopy was used to study the effect of plant antioxidants lycopene, pycnogenol and grape seed extract on scavenging gas-phase free radicals in cigarette smoke.

Serbest Radikaller Mainstream Sigara Duman algılama ve gaz faz Atma Protokolü

Cigarette smoking is associated with human cancers. It has been reported that most of the lung cancer deaths are caused by cigarette smoking 5,6,7,12.  ...

Biyomühendislik

Bridging the Bio-Electronic Interface with Biofabrication

Advancements in lab-on-a-chip technology promise to revolutionize both research and medicine through lower costs, better sensitivity, portability, and higher throughput. The incorporation of biological components onto biological microelectromechanical systems (bioMEMS) has shown great potential for achieving these goals. Microfabricated electronic chips allow for micrometer-scale features as well as an electrical connection for sensing and actuation. Functional biological components give the system the capacity for specific detection of analytes, enzymatic functions, and whole-cell capabilities. Standard microfabrication processes and bio-analytical techniques have been successfully utilized for decades in the computer and biological industries, respectively. Their combination and interfacing in a lab-on-a-chip environment, however, brings forth new challenges. There is a call for techniques that can build an interface between the electrode and biological component that is mild and is easy to fabricate and pattern.
Biofabrication, described here, is one such approach that has shown great promise for its easy-to-assemble incorporation of biological components with versatility in the on-chip functions that are enabled. Biofabrication uses biological materials and biological mechanisms (self-assembly, enzymatic assembly) for bottom-up hierarchical assembly. While our labs have demonstrated these concepts in many formats 1,2,3, here we demonstrate the assembly process based on electrodeposition followed by multiple applications of signal-based interactions. The assembly process consists of the electrodeposition of biocompatible stimuli-responsive polymer films on electrodes and their subsequent functionalization with biological components such as DNA, enzymes, or live cells 4,5. Electrodeposition takes advantage of the pH gradient created at the surface of a biased electrode from the electrolysis of water 6,7,. Chitosan and alginate are stimuli-responsive biological polymers that can be triggered to self-assemble into hydrogel films in response to imposed electrical signals 8. The thickness of these hydrogels is determined by the extent to which the pH gradient extends from the electrode. This can be modified using varying current densities and deposition times 6,7. This protocol will describe how chitosan films are deposited and functionalized by covalently attaching biological components to the abundant primary amine groups present on the film through either enzymatic or electrochemical methods 9,10. Alginate films and their entrapment of live cells will also be addressed 11. Finally, the utility of biofabrication is demonstrated through examples of signal-based interaction, including chemical-to-electrical, cell-to-cell, and also enzyme-to-cell signal transmission. 
Both the electrodeposition and functionalization can be performed under near-physiological conditions without the need for reagents and thus spare labile biological components from harsh conditions. Additionally, both chitosan and alginate have long been used for biologically-relevant purposes 12,13. Overall, biofabrication, a rapid technique that can be simply performed on a benchtop, can be used for creating micron scale patterns of functional biological components on electrodes and can be used for a variety of lab-on-a-chip applications.

This article describes a biofabrication approach: deposition of stimuli-responsive polysaccharides in the presence of biased electrodes to create biocompatible films which can be functionalized with cells or proteins. We demonstrate a bench-top strategy for the generation of the films as well as their basic uses for creating interactive biofunctionalized surfaces for lab-on-a-chip applications.

Biofabrication ile Bio-Elektronik Arayüz Bridging

Advancements in lab-on-a-chip technology promise to revolutionize both research and medicine through lower costs, better sensitivity, portability, and ...

A Microfluidic Device for Studying Multiple Distinct Strains

The study of cell responses to environmental changes poses many experimental challenges: cells need to be imaged under changing conditions, often in a comparative manner. Multiwell plates are routinely used to compare many different strains or cell lines, but allow limited control over the environment dynamics. Microfluidic devices, on the other hand, allow exquisite dynamic control over the surrounding conditions, but it is challenging to image and distinguish more than a few strains in them. Here we describe a method to easily and rapidly manufacture a microfluidic device capable of applying dynamically changing conditions to multiple distinct yeast strains in one channel. The device is designed and manufactured by simple means without the need for soft lithography. It is composed of a Y-shaped flow channel attached to a second layer harboring microwells. The strains are placed in separate microwells, and imaged under the exact same dynamic conditions. We demonstrate the use of the device for measuring protein localization responses to pulses of nutrient changes in different yeast strains.

We present a simple method to produce microfluidic devices capable of applying similar dynamic conditions to multiple distinct strains, without the need for a clean room or soft lithography.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

The study of cell responses to environmental changes poses many experimental challenges: cells need to be imaged under changing conditions, often in a ...

Impact Assessment of Repeated Exposure of Organotypic 3D Bronchial and Nasal Tissue Culture Models to Whole Cigarette Smoke

Cigarette smoke (CS) has a major impact on lung biology and may result in the development of lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease or lung cancer. To understand the underlying mechanisms of disease development, it would be important to examine the impact of CS exposure directly on lung tissues. However, this approach is difficult to implement in epidemiological studies because lung tissue sampling is complex and invasive. Alternatively, tissue culture models can facilitate the assessment of exposure impacts on the lung tissue. Submerged 2D cell cultures, such as normal human bronchial epithelial (NHBE) cell cultures, have traditionally been used for this purpose. However, they cannot be exposed directly to smoke in a similar manner to the in vivo exposure situation. Recently developed 3D tissue culture models better reflect the in vivo situation because they can be cultured at the air-liquid interface (ALI). Their basal sides are immersed in the culture medium; whereas, their apical sides are exposed to air. Moreover, organotypic tissue cultures that contain different type of cells, better represent the physiology of the tissue in vivo. In this work, the utilization of an in vitro exposure system to expose human organotypic bronchial and nasal tissue models to mainstream CS is demonstrated. Ciliary beating frequency and the activity of cytochrome P450s (CYP) 1A1/1B1 were measured to assess functional impacts of CS on the tissues. Furthermore, to examine CS-induced alterations at the molecular level, gene expression profiles were generated from the tissues following exposure. A slight increase in CYP1A1/1B1 activity was observed in CS-exposed tissues compared with air-exposed tissues. A network-and transcriptomics-based systems biology approach was sufficiently robust to demonstrate CS-induced alterations of xenobiotic metabolism that were similar to those observed in the bronchial and nasal epithelial cells obtained from smokers.

The aim of this protocol is to expose human organotypic 3D bronchial and nasal tissue models to mainstream cigarette smoke (CS) at the air-liquid interface. The impact of CS on the tissues is then investigated using a cytochrome P450 activity assay, a cilia beating measurement, and a systems biology approach.

Tüm Sigara Dumanına Organotipik 3D Bronşiyal ve Burun Doku Kültürü Modelleri Tekrarlanan Pozlama Etki Değerlendirmesi

Cigarette smoke (CS) has a major impact on lung biology and may result in the development of lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models reflect the human wound situation better than animal models. Although two-dimensional models are widely used to investigate processes such as cellular migration and proliferation, models that are more complex are required to gain a deeper knowledge about wound healing. Besides a suitable model system, the generation of precise and reproducible wounds is crucial to ensure comparable results between different test runs. In this study, the generation of a three-dimensional full thickness skin equivalent to study wound healing is shown. The dermal part of the models is comprised of human dermal fibroblast embedded in a rat-tail collagen type I hydrogel. Following the inoculation with human epidermal keratinocytes and consequent culture at the air-liquid interface, a multilayered epidermis is formed on top of the models. To study the wound healing process, we additionally developed an automated wounding device, which generates standardized wounds in a sterile atmosphere.

The goal of this protocol is to build up a three-dimensional full thickness skin equivalent, which resembles natural skin. With a specifically constructed automated wounding device, precise and reproducible wounds can be generated under maintenance of sterility.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Generation of Scalable, Metallic High-Aspect Ratio Nanocomposites in a Biological Liquid Medium

The goal of this protocol is to describe the synthesis of two novel biocomposites with high-aspect ratio structures. The biocomposites consist of copper and cystine, with either copper nanoparticles (CNPs) or copper sulfate contributing the metallic component. Synthesis is carried out in liquid under biological conditions (37 &#176;C) and the self-assembled composites form after 24 hr. Once formed, these composites are highly stable in both liquid media and in a dried form. The composites scale from the nano- to micro- range in length, and from a few microns to 25 nm in diameter. Field emission scanning electron microscopy with energy dispersive X-ray spectroscopy (EDX) demonstrated that sulfur was present in the NP-derived linear structures, while it was absent from the starting CNP material, thus confirming cystine as the source of sulfur in the final nanocomposites. During synthesis of these linear nano- and micro-composites, a diverse range of lengths of structures is formed in the synthesis vessel. Sonication of the liquid mixture after synthesis was demonstrated to assist in controlling average size of the structures by diminishing the average length with increased time of sonication. Since the formed structures are highly stable, do not agglomerate, and are formed in liquid phase, centrifugation may also be used to assist in concentrating and segregating formed composites.

Here we present a protocol to synthesize novel, high-aspect ratio biocomposites under biological conditions and in liquid media. The biocomposites scale from nanometers to micrometers in diameter and length, respectively. Copper nanoparticles (CNPs) and copper sulfate combined with cystine are the key components for the synthesis.

Biyolojik Sıvı Ortamda Ölçeklenebilir, Metalik Yüksek Aspect Ratio Nanokompositlerin Üretimi

The goal of this protocol is to describe the synthesis of two novel biocomposites with high-aspect ratio structures. The biocomposites consist of copper ...

Double Emulsion Generation Using a Polydimethylsiloxane (PDMS) Co-axial Flow Focus Device

Double emulsions are useful in a number of biological and industrial applications in which it is important to have an aqueous carrier fluid. This paper presents a polydimethylsiloxane (PDMS) microfluidic device capable of generating water/oil/water double emulsions using a coaxial flow focusing geometry that can be fabricated entirely using soft lithography. Similar to emulsion devices using glass capillaries, double emulsions can be formed in channels with uniform wettability and with dimensions much smaller than the channel sizes. Three dimensional flow focusing geometry is achieved by casting a pair of PDMS slabs using two layer soft lithography, then mating the slabs together in a clamshell configuration. Complementary locking features molded into the PDMS slabs enable the accurate registration of features on each of the slab surfaces. Device testing demonstrates formation of double emulsions from 14 &#181;m to 50 &#181;m in diameter while using large channels that are robust against fouling and clogging.

Double Emulsion Generation Using a Polydimethylsiloxane PDMS Co-axial Flow Focus Device

Microfluidic double emulsions generation typically involves devices with patterned wettability or custom-fabricated glass components. Here we describe the fabrication and testing of an all polydimethylsiloxane (PDMS) double emulsion generator that does not require surface treatment or complicated fabrication processes, and is capable of producing double emulsions down to 14 &#181;m.

Bir Polidimetilsiloksan (PDMS) Koaksiyel Akış Odak Aygıtı Kullanma Çift Emülsiyon Üretimi

Double emulsions are useful in a number of biological and industrial applications in which it is important to have an aqueous carrier fluid. This paper ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to spatially fractionate the sample based on a biological property of interest. For the resultant spatial distribution to be used as the assay readout, microfluidic devices are often subjected to microscopic analysis requiring complex instrumentation with higher cost and reduced portability. To address this limitation, we have developed an integrated electronic sensing technology for multiplexed detection of particles at different locations on a microfluidic chip. Our technology, called Microfluidic CODES, combines Resistive Pulse Sensing with Code Division Multiple Access to compress 2D spatial information into a 1D electrical signal. In this paper, we present a practical demonstration of the Microfluidic CODES technology to detect and size cultured cancer cells distributed over multiple microfluidic channels. As validated by the high-speed microscopy, our technology can accurately analyze dense cell populations all electronically without the need for an external instrument. As such, the Microfluidic CODES can potentially enable low-cost integrated lab-on-a-chip devices that are well suited for the point-of-care testing of biological samples.

We demonstrate a microfluidic platform with an integrated surface electrode network that combines resistive pulse sensing (RPS) with code division multiple access (CDMA), to multiplex detection and sizing of particles in multiple microfluidic channels.

Parçacıkların Mekansal Takip için Çoklanmış Elektronik Algılama ile mikroakışkan Platformu

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

A Simple and Scalable Fabrication Method for Organic Electronic Devices on Textiles

Today, wearable electronics devices combine a large variety of functional, stretchable, and flexible technologies. However, in many cases, these devices cannot be worn under everyday conditions. Therefore, textiles are commonly considered the best substrate to accommodate electronic devices in wearable use. In this paper, we describe how to selectively pattern organic electroactive materials on textiles from a solution in an easy and scalable manner. This versatile deposition technique enables the fabrication of wearable organic electronic devices on clothes.

In this paper, we present a protocol to selectively deposit organic materials on textiles, which allows for the direct integration of organic electronic devices with wearables. The fabricated devices can be fully integrated in textiles, respecting their mechanical appearance and enabling sensing capabilities.

Tekstil Organik Elektronik Cihazlar Basit ve Ölçeklenebilir Fabrikasyon Yöntemi

Today, wearable electronics devices combine a large variety of functional, stretchable, and flexible technologies. However, in many cases, these devices ...

A Converging Strategy for the Generation of a Virtually Sequenced cDNA Library from Unreferenced Pacific Oysters

The access to biological material of reference species, which were used previously in key experiments such as in the development of novel cell lines or genome sequencing projects, are often difficult to provide for further studies or third parties due to the consumptive nature of the samples. Although now widely distributed over the Pacific coasts of Asia, Australia and North America, individual Pacific oyster specimens are genetically quite diverse and are therefore not directly suitable as the starting material for gene libraries. In this article, we demonstrate the use of unreferenced Pacific oyster specimens obtained from regional seafood markets to generate cDNA libraries. These libraries were then compared to the publicly available oyster genome, and the closest related library was selected using the mitochondrial reference genes Cytochrome C Oxidase subunit I (COX1) and NADH Dehydrogenase (ND). The suitability of the generated cDNA library is also demonstrated by cloning and expression of two genes encoding the enzymes UDP-glucuronic acid dehydrogenase (UGD) and UDP-xylose synthase (UXS), which are responsible for the biosynthesis of UDP-xylose from UDP-glucose.

We describe a strategy for how to use RNA samples from unreferenced Pacific oyster specimens, and evaluate the genetic material by comparison with publicly available genome data to generate a virtually sequenced cDNA library.

Referansta bulunmadığı Pasifik Istiridyeleri neredeyse sıralı cDNA Kütüphanesi üretimi için bir converging stratejisi

The access to biological material of reference species, which were used previously in key experiments such as in the development of novel cell lines or ...