Bu yöntem, bu modeller ile ilişkili azaltmak için nasıl ve nasıl tekrarlanabilirlik geliştirmek gibi deneysel inme alanında anahtar soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, ortak karotis arter yoluyla yeniden perfüzyon sağlar, ve bu nedenle Willis daire üzerinde bağımlı değildir, hangi hayvanlar arasında anatomik olarak değişebilir, ve bu nedenle deneysel sonuç ölçülerinde görülen değişkenlik katkıda bulunabilir. CCA gemi onarım adımları cca tam patent olduğundan emin olmak için dolgu kullanırken ilgili teknik zorluk nedeniyle öğrenmek zor olduğundan, bu yöntemin görsel gösteri, onarım sonrasında önemlidir.
Başlamak için, test protokolüne göre fareyi hazırlayın ve anestezi yapın. Sonra maruz ventral boyun üzerinde 1.5cm orta hat kesi yapmak için bir numara 15 neşter bıçak kullanın. Künt diseksiyon teknikleri kullanarak, yavaşça yan tükürük bezleri geri, trakea ortaya çıkarmak için.
Sonra ortak karotis arter incelemek, veya CCA, çevre doku ve vagal sinir ücretsiz. Bundan sonra, CCA altında çözülemeyen 6-0 dikiş iki küçük bölümden geçmek, CCA dorsal, ve vagal sinir ventral. Cerraha bir ipek kravat daha yakın çizin ve CCA etrafında gevşek kravat.
Sonra gevşek iç ve dış karotis arterlerin çatallanma doğru ikinci bir ipek kravat kravat. Daha sonra, bifurkasyonun tıkanmamasını sağlayarak distal kravatın hemen üzerine bir mikrovasküler klip uygulayın. CCA küçük bir delik yapmak için mikro venöz makas kullanın.
CCA içine 7-0 silikon kaplı mikro filaman yerleştirin ve mikrovasküler klips doğru ilerletin. Sonra yerine filament bağlamak için distal kravat sıkın. Ve mikrovasküler klips kaldırmak için klips tutucuları kullanın.
Sonra, filaman iç karotis arter içine ilerlemek, veya ICA. Filament kafa distal kravat geçtikten sonra, sıkı kravat çekin, kan kaybını önlemek için. Distal ipek kravat kullanarak, kaldırın ve farenin vücudunun dış tarafına CCA çekin ve viraj filament yönlendirmek, pterygopalatine arter açılış geçmiş, veya PPA.
Filament yerleştirildikten sonra, distal ipek kravatı daha da sıkarak sabitle. MCAO döneminin sonunda, beyaz filament kafası açıkça görülene kadar filamenti geri çekin. Sonra distal CCA kravat sadece yeterli filament baş yol, damar dışında kaldırmak için gevşetin.
Daha sonra, iplik başlığını damardan tamamen çıkarın. Bundan sonra, yatay pozisyonda bir mikrovasküler klip söktü, CCA bifurkasyon doğru, ve distal kravat yanında. Sonra cerrah doğru proksimal CCA kravat altında başka bir klip söyit.
Dikkatle ipek bağları her ikisi de kaldırmak için Dumont 5 forseps kullanın. Ve steril pamuk tomurcukları kullanarak alanı kuru. Sonra steril petri kabına Fibrinojen ve Trombin dolgu solüsyonu bir ve iki ekleyin.
Mikro venöz makas ve künt diseksiyon tekniği kullanarak, sternokleidomastoid kas ince bir ventral dilim elde. Daha sonra, Dumont 5 forceps kullanarak, doku pedi almak ve Fibrinojen ve Trombin dolgu solüsyonları arasında eşit karıştırın. Burada doku yastığı CCA kesi kapsayacak kadar büyük olduğundan emin olmak önemlidir.
Ve bir kez iki çözelti arasında karıştırılır, hemen kesi üzerine yerleştirilmelidir, aşırı pıhtılaşma ve kötü yapışmaönlemek için. Bir kez iki çözelti arasında karışık, CCA kesi doku yastığı çıkarın. Doku yastığını orta basınçve açık forceps ile kesi üzerine düz bir şekilde yerleştirin.
Doku yastığını yerinde tutarken distal mikrovasküler klipsi hızla çıkarın. Daha sonra, yavaş yavaş doku yastığı gelen basıncı hafifletmek, kan kesi alanı altında akmasını sağlayan. Şimdi, yavaş yavaş ve yavaşça proksimal mikrovasküler klip basınç bırakın, sonra tamamen kaldırın.
Üst klips çıkarılması dolgu aktive etmek için kan küçük bir miktar sağlar. Distal klipsin sürekli salınımı, kesi yerinde kademeli bir basınç artışı sağlar, daha fazla etkinleştirme ve başarısız bir onarımı önlemeye yardımcı olur. Son olarak, bir kez damar mühürlü, çözülebilir 6-0 dikişler ile yara dikiş.
Bu protokolde 24 erişkin erkek fareye orta serebral arter oklüzyonu veya MCAO uygulandı. ECA ligasyonu bir kaçınma ve analjezi eklenmesi MCAO sonrası 48 saat azaltılmış kilo kaybı doğru bir eğilim gösterdi. Filament çıkarılmasından beş dakika sonra, bölgesel serebral kan akımı MCA beyin bölgesinde önemli ölçüde arttı.
Perfüzyon, CCA gemi onarımı sonrası MCA bölgesine perfüzyon artışı ile damar onarımına kadar sürdürüldü. Bu CCA onarım iskemik bölgeye artan kan perfüzyonu izin düşündürmektedir, Willis daire tek başına güven ile karşılaştırıldığında. McAO'dan 48 saat sonra çekirdek LV'yi belirlemek için total LV ve DTI taramaları belirlemek için T2 ağırlıklı MRG kullanıldı.
Bu iki grup arasında anlamlı bir fark yoktu. İlginçtir, toplam ve çekirdek LV için bir değişkenlik önemli ölçüde CCA onarım grubunda azaltıldı. Analizlerimiz, tipik CCA ligated prosedürüne karşı CCA onarımı kullanarak MCAO'dan sonra LV'de %30 azalma göstermek için tedavi grubu başına daha az hayvanın gerekli olacağını göstermiştir.
Bu prosedürü çalışırken, doku paketi CCA kesi kapsayacak şekilde yeterli boyutta olduğundan emin olmak için hatırlamak önemlidir. Ayrıca, hız önemlidir, dolgu aşırı pıhtılaşma önlemek için, CCA üzerine yastık yerleştirmeden önce.
