Monoküler görme yoksunluğu primer görsel kortikal yanıt plastisite indüklemek için mükemmel bir deneysel protokoldür. Normalde, fare birincil görsel korteks in dürbün segmentinde nöronlar ipsilateral göz olarak kontralateral göz uyarılması yaklaşık iki kat daha güçlü yanıt. Ancak, dikiş oküler hakimiyet plastisite için kritik dönemde kontralateral göz kapalı contralateral göz stimülasyon V1 nöronlar tarafından hızlı yanıt kaybı ve aynı zamanda ipsilateral göz yanıtı nda bir sonraki artış takip neden.
Burada, monoküler yoksunluk için deneysel protokolü tanıtmak ve görsel yoksunluk sırasında oküler hakimiyeti eğilimi analiz etmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem önermek. Cerrahi aletleri alüminyum bir kutuya koyun ve yarım saat boyunca 120 santigrat derecenin altına koyun. Su banyosu nda %2 agarose çözeltisi hazırlayın ve 75 santigrat derecede saklayın.
Her iki göze ince bir göz merhemi tabakası uygulayın. Aydınlatma ile anatomik mikroskop altında, göz kapakları dikiş. Yaklaşık dört dikiş at.
İş parçacığının 2-3 düğümünü yapın. Düğümün stabilitesini artırmak için düğümün başına üç mikrolitre instant kurutma tutkal 502 uygulayın. Sonra yeterince kısa iplik kesti.
Fare tamamen uyanık olduğunda, onları ayrı bir tutma kafesine yerleştirin. Elektrofizyolojik kayıttan önce fareyi anestezik için isoflurane kullanın. Dikişleri çıkarın ve göz küresini ortaya çıkarın.
Göz kapağını dikkatlice kırpın. Kontakt lens çözümleri ile gözleri temizleyin ve netlik için gözleri kontrol edin. Sadece göz bebeklerinin iyi durumda olan faresi kullanılabilir.
Fareyi uyuşdurarak dıktan sonra fareyi stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin. Prosedür boyunca vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı kullanın. Nemli tutmak için göz merhemini göz yüzeyine uygulayın.
Cildini ortaya çıkarmak için farenin saçını çıkarın. Kafatasını ortaya çıkarmak ve kafa derisi dokusunu çıkarmak için her iki kulak arasındaki sekiz milimetrelik deri ile çarpılarak sekiz milimetrelik bir deri eğimi. Sonra hidrojen peroksit ile örten bağ dokusu kaldırın.
Beyincik üzerinde kafatasında bir delik aç. Referans olarak delikküçük bir kemik vida düzeltmek. V1 dürbün bölgesinde çapı bir milimetre küçük bir kraniyotomi gerçekleştirin.
Dikkatle beyin zarar vermeden kafatası parçası çıkarın. Kurumasını önlemek için açık kortikal yüzeyin %2 agarose ile kaplayın. Stereotaksik çerçeve üzerinde bir tungsten elektrot düzeltmek.
Kaydedilen hücrelerin her iki göze de tepki verdiğinden emin olmak için tungsten elektrodu dikey olarak dürbün V1 bölgesine yerleştirin. Uyarıcı rastgele bir blokta 30 derece ile ayrılır. Her ölçümde toplam üç ila beş blok sunuldu.
Şeffaf olmayan plastik plaka ile maske bir göz. Farenin gözlerinden 23 santimetre pozisyona LCD1'i sunun. Yağ hidrolik mikromanipülatör tarafından yavaş yavaş mikroelektrot ilerletin.
Elektrot dördüncü katmana ilerlediğinde ilerlemeyi durdurun yüksek sinyal gürültü oranı sinyalini durdurun ve ölçüme başlayın. Başak aktivitelerini 1,000'lik bir faktörle yükseltiyoruz ve 300 ile 10 kilohertz arasında filtreleyip 40 kilohertz'de örnekliyoruz. Sonra diğer gözü maskeleyin ve kontralateral gözün tepkisini ölçün.
Tek elektrotlarla ölçülen sinyaller popülasyon aktiviteleridir. Farklı hücrelerin ani artışlarını ayırmak için yazılımı kullanın. İlk olarak, 500 ila 5, 000 hertz arasında sinyal filtre.
Biri pozitif sapma, diğeri negatif sapma aniları için olmak üzere iki imleç ayarlayın. Başak şablonları ayarlayın. Farklı ani artış sınıfları arasındaki en büyük varyasyonu gösterdiği şablonalanını ayarlayın.
Kümeler halinde ayırmak için ana bileşenler çözümlemesi kullanın. K algoritması kullanarak bir sınırın ani artışlarını sınıflandırmak. Oryantasyonu ani ateşleme hızıyla ilişkilendirin ve ipsilateral ve kontralateral gözler için oryantasyon akort eğrilerini çizin.
Daha sonra, kontralateral ve ipsilateral yanıtı temsil eden tek hücreler için OD indeksi hesaplamak OD indeksi göre her hücre için bir OD puanı atamak. Formüle göre kontralateral önyargı dizini hesaplayın. Bu diyagram, monoküler yoksun ve yoksun olmayan farede ipsilateral ve kontralateral gözün yön tuning eğrilerini gösterir.
Bu protokol, kritik dönemde yoksun ve yoksun bir fareden başarılı monoküler görme yoksunluğu ve göz hakimiyeti ölçümü sağlar. Size bu deneyi nasıl başarabileceğinizi gösterdik ve görsel yoksunluk sırasında göz seli değişimini analiz ettik. Deney sırasında, elektrofizyolojik kayıt sırasında dikiş işlemi ve etkileşiminde enfeksiyondan kaçınmak önemlidir.
Videomuzu izlediğiniz için teşekkürler.
