Bu çalışma, Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan (MEXT) Grant-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (Toshihide Kurihara'ya 18K09424 ve Yukihiro Miwa'ya 20K18393) tarafından desteklendi.

Burada açıklanan tüm yöntemler Keio Üniversitesi Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Cerrahi aletlerin ve hayvanların hazırlanması
<ol><li>Cerrahi aletleri otoklavlayın ve% 70 etil alkolde saklayın. Her yeni cerrahi işlemden önce cerrahi aletleri %70 etil alkol kullanarak dikkatlice temizleyin.</li>
	<li>Ameliyattan önce, ameliyat sırasında ve sonrasında steril koşulları korumak için erkek BALB/cAJc1 farelerini (6 haftalık, 26-28 kg) belirli patojensiz (SPF) bir odada hazırlayın.</li>
</ol>2. Geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma (tBCCAO)
<ol><li>Daha önceaçıklandığıgibi "MMB" olarak adlandırılan midazolam (40 μg/100 μL), medetomidin (7,5 μg/100 μL) ve butorphanol tartrate (50 μg/100 μL) kombinasyonu ile intraperitoneal enjeksiyon yoluyla bir fareyi anestezi altınaalın. Fare tamamen uyuşturulana kadar farenin gözlerini çarpmamasını önlemek için farenin arka kaplamalarını tutun.<ol>
<li>Tam anesteziyi kontrol etmek için yaygın olarak kullanılan yöntem olan yanıt alıncaya kadar fare baş parmağına sıkıştırarak anestezinin derinliğini yargılayın10. NOT: Farelerin uykuya dalmasına genellikle 5 dakikadan az bir süre gerekir. Genel anestezi için uygun tarifler kurumlar tarafından farklı olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Anestezi altında gözlerde kuruluğu önlemek için gözlere % 0.1 saflaştırılmış sodyum hyaluronat göz damlası çözeltisi uygulayın.</li>
	<li>Fareyi arkasına yerleştirin ve yapışkan bantlar kullanarak farenin pençelerini sabitleyin.</li>
	<li>Ameliyattan önce %70 etil alkol kullanarak farenin boyun bölgesini dezenfekte edin. NOT: Kürkün ek kupürü, sonraki cilt iltihabına neden olabileceğinden yapılmamıştır11,12.</li>
	<li>Boynun sagittal kesisini bir bıçakla gerçekleştirin (Şekil 1). NOT: Boyun, sternum ve trakea arasındaki orta hatta kesi yapılması gerekir.</li>
	<li>Her iki tükürük bezini de iki forseps kullanarak dikkatlice ayırın ve alttaki CCA'ları görselleştirmek için harekete geçirin.</li>
	<li>Doğru CCA'yı ilgili vagal sinirlerden ve eşlik eden damarlardan yapılarına zarar vermeden dikkatlice izole edin ve CCA'nın altına iki adet 6-0 ipek dikiş yerleştirin. Kan akışını engellemek için iki bağı sıkıca bağlayın (Şekil 1). NOT: İşlem sırasında küçük damarlar zarar görmüş olabilir. Kanama görülürse, CDA'ları net bir şekilde görselleştirmek için silme gereklidir.</li>
	<li>Sol CCA'yı ilgili vagal sinirlerden ve eşlik eden damarlardan yapılarına zarar vermeden dikkatlice bulun ve sol CCA'yı bir kelepçe ile 2 saniye boyunca tıkayın (Şekil 1). NOT: Bir yeri sıkıştırmak için sol CCA'nın altına 6-0 ipek dikiş iğnesi yerleştirilmesi gerekir.</li>
	<li>Sol CCA'nın yeniden açılmasından sonra, boynun dikiş yaraları 6-0 ipek dikiş ile ve bakteriyel enfeksiyonu inhibe etmek için boyuna bir dab antibiyotik (50 μL) uygulayın. NOT: Sol CCA'nın yeniden açılması sırasında arteriyel duvara zarar vermemek için bir kelepçeyi yavaşça çıkarın.</li>
	<li>Farenin derin anesteziden hızlı bir şekilde kurtulmasına yardımcı olmak için fareye intraperitoneal olarak 0,75 mg/kg atipamezole hidroklorür enjekte edin. Fareyi önceden ısıtılmış pedlere sahip bir fare kafesine geri döndürün. NOT: Fare sternal recumbency korumak için yeterli bilinci kazanana kadar farenin başıboş kalmasına izin vermeyin.</li>
	<li>Fare uyandığında ağrının yönetimi için fareye 0,4 mg / kg butorphanol tartrate enjekte edin. NOT: Protokol burada duraklatılabilir. Başarılı tBCCAO için ilk ipucu olarak, farenin göz kapağı sarkması gözlenebilir (Şekil 2).</li>
	<li>Ötenazi için, farelere 3x MMB karışımı enjekte edin ve deneyler için kurban edin.</li>
</ol>3. Genel gözlemler (sağkalım oranları ve göz kapağı sarkması)
<ol><li>Ameliyattan sonra, 0 (ameliyattan sonra), 1, 3 ve 7.</li>
	<li>Göz kapağı sarkması 4 puanlık bir derecelendirme ölçeği ile değerlendirin: 1 = sarkma yok, 2 = hafif sarkıklık (~%50), 3 = şiddetli sarkıklık (%50'nin üzerinde) ve 4 = göz akıntısı ile şiddetli sarkıklık.</li>
</ol>4. Retina kanı perfüzyonu
<ol><li>Fare retina damarlarında kan perfüzyonunun gözlemlenmesi için yaygın olarak kullanılan farenin sol ventrikülüne 200 μL FITC-dektran (25 mg/mL) enjekte edin13,14.</li>
	<li>Dolaşımdan 2 dakika sonra, gözleri enükle edin ve 1 saat boyunca% 4 paraformaldehitte sabitleyin. Retinalar, daha önce15olarak tanımlandığı gibi dikkatlice elde edildi ve düz monte edildi ve floresan mikroskobu ile incelendi.</li>
	<li>Retina bütün montajlarının fotoğraflarını 4x büyütmede çekin ve daha önce açıklanan bir birleştirme çözümleyicisi kullanarak tek bir tanede birleştirin16.</li>
	<li>NIH Fiji/ImageJ yazılımındaki bir gemi analiz aracıyla perfüzyon alanlarını ölçün.</li>
</ol>5. Batı lekesi
<ol><li>TBCCAO'dan 3 ve 6 saat sonra, farelerin gözlerini elde edin ve retinaları izole etmek için hemen soğuk PBS içeren bir Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Retinaların izolasyonundan sonra, daha önce açıklandığı gibi batı şişkinliği gerçekleştirin9.</li>
	<li>Hipoksi-indükleyici faktör-1α (HIF-1α; genel bir hipoksi belirteci) ve β-Actin (iç yükleme kontrolü) için bir gecede antikorlarla kuluçkaya yatırın ve ardından HRP konjuge sekonder antikorların inkübasyonu. Sinyalleri chemiluminescence ile görselleştirin.</li>
</ol>6. Nicel PCR (qPCR)
<ol><li>tBCCAO'dan 6, 12 ve 24 saat sonra, daha önce açıklandığı gibi qPCR için elde edilen retinaları işleyin17.</li>
	<li>QPCR'ı gerçek zamanlı PCR sistemi ile gerçekleştirin. Kullanılan astarlar Tablo 1'de listelenmiştir. ΔΔCT yöntemi ile farklı transkript seviyeleri arasındaki kat değişimlerini hesaplayın.</li>
</ol>7. İmmünohistokimya (IHC)
<ol><li>TBCCAO'dan 3 gün sonra farelerin gözlerini elde edin ve parafin içine gömün.</li>
	<li>Göz bölümlerini elde etmek için parafin gömülü gözleri bir mikrotom ile kesin.</li>
	<li>Daha önce açıklandığı gibi 5 μm kalınlığındaki göz bölümlerini renksizleştirin ve lekelendirin13.</li>
	<li>Glial fibril asidik protein (GFAP; retinadaki astrositler ve Müller hücreler için güvenilir bir belirteç) için bir antikor ile kuluçkaya yatır ve ardından Alexa Fluor 555 konjuge sekonder antikor inkübasyonu.</li>
	<li>Retinadaki çekirdeği boyamak için DAPI (4′, 6-diamidino-2-fenylindole) kullanın. Sinyalleri floresan mikroskopla görselleştirin.</li>
	<li>Morfoloji puanlamasını daha önce açıklandığı gibi 4 puanlık bir derecelendirme ölçeğiyle değerlendirin13,18: 0 = sinyal yok, 1 = ganglion hücre katmanında (GCL) birkaç pozitif glial son ayak, 2 = GCL'den dış nükleer katmana (ONL) ulaşan birkaç etiketli süreç ve GCL'den ONL'ye ulaşan en etiketli süreçler.</li>
</ol>8. Elektroretinografi (ERG)
<ol><li>tBCCAO'dan 3 ve 7 gün sonra, daha önce açıklandığı gibi bir Ganzfeld kubbesi, satın alma sistemi ve LED uyarıcılar kullanarak ERG gerçekleştirin9.</li>
	<li>Bir gecede karanlık adaptasyonu takiben, fareleri loş kırmızı ışık altında MMB kombinasyonu ile uyuşturun.</li>
	<li>Gözbebeklerini genişletmek için %0,5 tropikamid ve %0,5 fenilefrin gibi karışık bir çözelti kullanın.</li>
	<li>Aktif elektrotları kontakt lense yerleştirin ve referans elektrotları ağız içine yerleştirin.</li>
	<li>Her hayvanın her iki gözünden ERG yanıtları alın.</li>
	<li>Çeşitli uyaranlarla karanlık adaptasyon altında scotopik yanıtları kaydedin.</li>
	<li>Bir dalganın genliklerini taban çizgisine ve en düşük dalga noktasına kadar ölçün.</li>
	<li>B dalgasının genliklerini bir dalganın en düşük noktasından b dalgasının zirvesine kadar ölçün.</li>
	<li>İşlem sırasında ısı pedlerini kullanarak tüm fareleri sıcak tutun.</li>
</ol>9. Optik tutarlılık tomografisi (OCT)
<ol><li>tBCCAO'dan 2 hafta sonra, daha önce bildirildiği gibi SD-OCT sistemini kullanarak OCTgerçekleştirin8,9.</li>
	<li>Ölçüm için, fareleri% 0.5 tropikamid ve% 0.5 fenilefrin karışımı ile midriasis'e ve MMB karışımı ile genel anesteziye tabi edin.</li>
	<li>Ekvatoral en-face tarama dilimlerinden B tarama görüntüleri elde edin.</li>
	<li>Retinaları optik sinir kafasından 0.2, 0.4 ve 0.6 mm'de inceleyin.</li>
	<li>Retina sinir lifi tabakasından (NFL) dış sınırlayıcı zara (ELM) kadar retina kalınlığını ölçün ve ölçülen değerlerin ortalamasını tek bir farenin retina kalınlığı olarak düşünün.</li>
	<li>Sonuçları örümcek diyagramları olarak çizin.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Çalışmada, tBCCAO'nun basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak retina iskemisini ve eşlik eden retina disfonksiyonu indükleyebileceğini gösterdik. Ayrıca, retina iskemisinin bir fare modelinin geliştirilmesi için mevcut protokolümüzü gösterdik retina iskemisinin geliştirilmesi için önceki protokollere kıyasla daha kolay ve hızlıdır retinal iskemik yaralanma modelleri2,3,7.
Anato...

Retina görme fonksiyonu için nörosensör bir dokudur. Görme fonksiyonu için önemli miktarda oksijen gerektiğinden, retina vücuttaki en yüksek oksijen talep eden dokulardan biri olarak bilinir1. Oksijen kan damarlarından iletilirken retina damar hastalıklarına karşı hassastır. Diyabetik retinopati ve retinal kan damarı (damarlar veya arterler) tıkanıklığı gibi çeşitli damar hastalıkları retina iskemisine neden olabilir. Retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını araştırmak için retina iskemisinin tekrarlanabilir ve klinik olarak ilgili deneysel modelleri gerekli kabul edilir. Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) intralüminal filament takılarak deneysel serebral iskemi2,3in vivo kemirgen modellerinin geliştirilmesi için en genel olarak kullanılan yöntemdir. Oftalmik arterin (OpA) MCA'ya yakınlığı nedeniyle, MCAO modelleri retina iskemisinin patofizyolojisini anlamak için aynı anda da kullanılır4,5,6. Retina iskemisi ile birlikte serebral iskemiyi teşvik etmek için, uzun filamentler tipik olarak ortak karotis arterin (CCA) veya dış karotid arterin (ECA) kesisi yoluyla yerleştirilir. Bu yöntemlerin yapılması zordur, ameliyatı tamamlamak için uzun bir süre gerektirir (bir fare için 60 dakikadan fazla) ve ameliyattan sonraki sonuçlarda yüksek farklılıklara yol açar7. Bu endişeleri iyileştirmek için daha iyi bir model geliştirmek önemli olmaya devam ediyor.
Bu çalışmada, farelerde retina iskemisini indük etmek için iğneler ve bir kelepçe ile kısa geçici bilateral CCA tıkanıklığı (tBCCAO) kullandık ve retinadaki iskemik yaralanmaların tipik sonuçlarını analiz ettik. Bu videoda, tBCCAO prosedürünün bir gösterisini vereceğiz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Zenoaq</td>
			<td>Antisedan</td>
			<td>For anti-anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems 7500 Fast</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>For qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Meiji Seika Pharma</td>
			<td>Vetorphale</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BZ-II Analyzer</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>-</td>
			<td>For an image merge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/cAJc1</td>
			<td>CLEA</td>
			<td>-</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin (8H10D10) Mouse mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>3700</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp Forcep</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI 500451</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>340-07971</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envisu SD-OCT system</td>
			<td>Leica</td>
			<td>R4310</td>
			<td>For OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran</td>
			<td>Merk</td>
			<td>FD2000S</td>
			<td>For retinal blood perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>BZ-9000</td>
			<td>For fluorescence detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gatifloxacin hydrate</td>
			<td>Senju Pharmaceutical</td>
			<td>Gachifuro</td>
			<td>For anti-bacterial infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>13-0300</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Marukan</td>
			<td>RH-200</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIF-1&#945; (D1S7W) XP Rabbit mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>36169</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageQuant LAS 4000 mini</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>-</td>
			<td>For chemiluminescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Sandoz K.K</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome Tissue-Tek TEC 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>-</td>
			<td>For sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>Domitor</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Handaya</td>
			<td>HS-2307</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PuREC</td>
			<td>MAYO Corporation</td>
			<td>-</td>
			<td>For ERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hyaluronate</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Hyalein</td>
			<td>For eye lubrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide/Penylephrine hydrochloride</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Mydrin-P</td>
			<td>For mydriasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 silk suture</td>
			<td>Natsume</td>
			<td>E12-60N2</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion

Diyabetik retinopati, retinal damarların veya arterlerin tıkanması ve oküler iskemik sendrom gibi çeşitli damar hastalıkları retina iskemisine yol açabilir. Retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını araştırmak için ilgili deneysel modellerin geliştirilmesi gerekir. Anatomik olarak, ana retina kan sağlayan bir damar oftalmik arterdir (OpA) ve OpA yaygın karotis arterin (CCA) iç karotis arterinden kaynaklanır. Bu nedenle, CCA'nın bozulması etkili bir şekilde retina iskemisi neden olabilir. Burada, sağ CCA'yı 6-0 ipek dikişlerle bağlamak ve sol CCA'yı bir kelepçe ile 2 saniye boyunca geçici olarak tıkamak için geçici bilateral ortak karotis arter tıkanıklığı (tBCCAO) ile retina iskemisinin bir fare modelini kurduk ve tBCCAO'nun retina disfonksiyonuna yol açan akut retina iskemisine neden olabileceğini gösterdik. Mevcut yöntem, sadece cerrahi iğneler ve bir kelepçe kullanarak cerrahi aletlere olan güveni azaltır, genellikle orta serebral arter tıkanıklığının fare modellerinde görülen beklenmedik hayvan ölümünü en aza indirmek için tıkanma süresini kısaltır ve yaygın retina iskemik bulgularının tekrarlanabilirliğini korur. Model, farelerde iskemik retinopatilerin patofizyolojisini araştırmak için kullanılabilir ve in vivo ilaç taraması için daha fazla kullanılabilir.

FITC-dektranın 2 dakika boyunca sistemik dolaşımından sonra, sham ile çalışan farelerde ve tBCCAO tarafından işletilen farelerde sol ve sağ retinaların retinal vaskülatları incelendi (Ek Şekil 1). FITC-dektran, sham tarafından işletilen farelerde hem retinalarda hem de tBCCAO tarafından işletilen farelerde sol retinada tamamen görünürken, tBCCAO tarafından işletilen farelerde sağ retinada kısmen tespit edilebilirdi.
TBCCAO'dan sonra göz kapağı sarkm...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

a-murine-model-ischemic-retinal-injury-induced-transient-bilateral

Research

JoVE Journal

Medicine

7.4K Görüntüleme.  Keio University School of Medicine. Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Video: A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified version of carotid partial ligation methods [1,2] to show that it acutely induces low and oscillatory flow conditions, two key characteristics of disturbed flow, in the mouse common carotid artery. Using this model, we have provided direct evidence that disturbed flow indeed leads to rapid and robust atherosclerosis development in Apolipoprotein E knockout mouse [3]. We also developed a method of endothelial RNA preparation with high purity from the mouse carotid intima [3]. Using this mouse model and method, we found that partial ligation causes endothelial dysfunction in a week, followed by robust and rapid atheroma formation in two weeks in a hyperlipidemic mouse model along with features of complex lesion formation such as intraplaque neovascularization by four weeks. This rapid in vivo model and the endothelial RNA preparation method could be used to determine molecular mechanisms underlying flow-dependent regulation of vascular biology and diseases. Also, it could be used to test various therapeutic interventions targeting endothelial dysfunction and atherosclerosis in considerably reduced study duration.

This describes a partial carotid ligation surgery, which causes disturbed flow conditions and subsequent atherosclerosis development (in two weeks) with intraplaque neo-vascularization (in four weeks) in the mouse common carotid artery. We also describe a novel method of RNA isolation from the carotid intima, providing high purity endothelial RNA.

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Tıp

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

Yetişkin Fare Venöz Hipertansiyon Modeli: Dış Boyun Ven Anastomoza Ortak Karotis Arter.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves focal endothelial-selective transgenesis, thereby allowing an investigator to determine the biological roles of endothelial-expressed transgenes and to quantify the in vivo transcriptional activity of DNA sequences in large artery endothelial cells. The method uses surgical isolation of rabbit common carotid arteries and an arteriotomy to deliver a transgene-expressing viral vector into the arterial lumen. A short incubation period of the vector in the lumen, with subsequent aspiration of the lumen contents, is sufficient to achieve efficient and durable expression of the transgene in the endothelium, with no detectable transduction or expression outside of the isolated arterial segment. The method allows assessment of the biological activities of transgene products both in normal arteries and in models of human vascular disease, while avoiding systemic effects that could be caused either by targeting gene delivery to other sites (e.g. the liver) or by the alternative approach of delivering genetic constructs to the endothelium by germ line transgenesis. Application of the method is limited by the need for a skilled surgeon and anesthetist, a well-equipped operating room, the costs of purchasing and housing rabbits, and the need for expertise in gene-transfer vector construction and use. Results obtained with this method include: transgene-related alterations in arterial structure, cellularity, extracellular matrix, or vasomotor function; increases or reductions in arterial inflammation; alterations in vascular cell apoptosis; and progression, retardation, or regression of diseases such as intimal hyperplasia or atherosclerosis. The method also allows measurement of the ability of native and synthetic DNA regulatory sequences to alter transgene expression in endothelial cells, providing results that include: levels of transgene mRNA, levels of transgene protein, and levels of transgene enzymatic activity.

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

This method is to introduce a transgene into the endothelium of rabbit carotid arteries. Introduction of the transgene allows the assessment of the biological role of the transgene product either in normal arteries or disease models. The method is also useful for measuring activity of DNA regulatory sequences.

Vivo Gen transferi için tavşan ortak Karotid arter endotel

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, intimal hyperplasia, and atherosclerosis. The goal of this article is to demonstrate a method for placing bilateral venous interposition grafts in a rabbit, then transducing the grafts with a gene transfer vector that achieves durable transgene expression. The method allows the investigation of the biological roles of genes and their protein products in normal vein graft homeostasis. It also allows the testing of transgenes for the activities that could prevent vein graft failure, e.g., whether the expression of a transgene prevents the neointimal growth, reduces the vascular inflammation, or reduces atherosclerosis in rabbits fed with a high-fat diet. During an initial survival surgery, the segments of right and left external jugular vein are excised and placed bilaterally as reversed end-to-side common carotid artery interposition grafts. During a second survival surgery, performed 28 days later, each of the grafts is isolated from the circulation with vascular clips and the lumens are filled (via an arteriotomy) with a solution containing a helper-dependent adenoviral (HDAd) vector. After a 20-min incubation, the vector solution is aspirated, the arteriotomy is repaired, and flow is restored. The veins are harvested at time points dictated by individual experimental protocols. The 28-day delay between the graft placement and the transduction is necessary to ensure the adaptation of the vein graft to the arterial circulation. This adaptation avoids rapid loss of transgene expression that occurs in vein grafts transduced before or immediately after grafting. The method is unique in its ability to achieve durable, stable transgene expression in grafted veins. Compared to other large animal vein graft models, rabbits have advantages of low cost and easy handling. Compared to rodent vein graft models, rabbits have larger and easier-to-manipulate blood vessels that provide abundant tissue for analysis.

This method describes the placement of interposition vein grafts in rabbits, the transduction of the grafts, and the achievement of durable transgene expression. This allows the investigation of physiological and pathological roles of transgenes and their protein products in grafted veins, and testing of gene therapies for vein graft disease.

Tavşan manken dayanıklı Transgene ifade juguler ven ortak karotid arter interpozisyonu Greftler için

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Ferric Chloride-induced Canine Carotid Artery Thrombosis: A Large Animal Model of Vascular Injury

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, we have translated a vascular injury model from a small animal into a large animal (canine), with slight modifications that can be used for pre-clinical screening of prophylactic and thrombolytic agents. In addition to the surgical methods, the modified protocol describes the step-by-step methods to assess carotid artery canalization by angiography, detailed instructions to process both the brain and carotid artery for histological analysis to verify carotid canalization and cerebral hemorrhage, and specific parameters to complete an assessment of downstream thromboembolic events by utilizing magnetic resonance imaging (MRI). In addition, specific procedural changes from the previously well-established small animal model necessary to translate into a large animal (canine) vascular injury are discussed.

Here, we present the modifications necessary to a well characterized and commonly used small animal ferric chloride-induced (FeCl3) carotid artery injury model for use in a large animal vascular injury model. The resulting model can be utilized for pre-clinical trial assessment of both prophylactic and thrombolytic pharmacological and mechanical interventions.

Ferrik klorid kaynaklı köpek karotid arter trombozu: Bir büyük hayvan modeli vasküler yaralanma

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...