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Overview

1:25

Principles of Culturing and Enumerating Soil Bacteria

3:33

Preparation of Soil Dilutions

4:29

Making Spread Plates for Bacterial Culture

6:20

Bacterial and Actinomycetes Counts

7:09

Isolation of Pure Cultures

8:41

Applications

10:31

Summary

Coltura e conta di batteri da campioni di suolo

Fonte: Laboratori del Dr. Ian Pepper e del Dr. Charles Gerba - Università dell'Arizona
Autori dimostrativi: Bradley Schmitz e Luisa Ikner

I terreni superficiali sono una miscela eterogenea di particelle inorganiche e organiche che si combinano insieme per formare aggregati secondari. All'interno e tra gli aggregati ci sono vuoti o pori che contengono visivamente sia aria che acqua. Queste condizioni creano un ecosistema ideale per i batteri, quindi tutti i terreni contengono vaste popolazioni di batteri, di solito oltre 1 milione per grammo di suolo.

I batteri sono il più semplice dei microrganismi, noti come procarioti. All'interno di questo gruppo procariotico, ci sono i microbi filamentosi noti come actinomiceti. Gli actinomiceti sono in realtà batteri, ma sono spesso considerati un gruppo unico all'interno della classificazione dei batteri a causa della loro struttura filamentosa, che consiste in più cellule infilate insieme per formare ife. Questo esperimento utilizza i mezzi del glicerolo che selezionano le colonie di actinomiceti, durante la diluizione e la placcatura. Tipicamente, gli actinomiceti sono circa il 10% della popolazione batterica totale. Batteri e actinomiceti si trovano in ogni ambiente sulla Terra, ma l'abbondanza e la diversità di questi microbi nel suolo non ha eguali. Questi microbi sono anche essenziali per la vita umana e influenzano ciò che le persone mangiano, bevono, respirano o toccano. Inoltre, ci sono specie batteriche che possono infettare le persone e causare malattie, e ci sono batteri che possono produrre prodotti naturali in grado di guarire le persone. Gli actinomiceti sono particolarmente importanti per la produzione di antibiotici, come la streptomicina. I batteri sono fondamentali per il ciclo dei nutrienti, la crescita delle piante e la degradazione dei contaminanti organici.

I batteri sono molto diversi in termini di numero di specie che si possono trovare nel suolo, in parte perché sono fisiologicamente e metabolicamente diversi. I batteri possono essere eterotrofici, il che significa che utilizzano composti organici, come il glucosio, per il cibo e l'energia, o autotrofici, il che significa che utilizzano composti inorganici, come lo zolfo elementare, per il cibo e l'energia. Possono anche essere aerobici, utilizzando ossigeno per la respirazione, o anaerobici, utilizzando forme combinate di ossigeno, come nitrato o solfato, per respirare. Alcuni batteri possono utilizzare ossigeno o forme combinate di ossigeno e sono noti come anaerobi facoltativi.

1. Preparazione delle diluizioni del suolo

  1. Per iniziare la procedura, pesare 10 g di campione di terreno e aggiungere a 95 ml di acqua deionizzata. Agitare bene la sospensione ed etichettare come "A".
  2. Prima che il terreno si depositi, rimuovere 1 mL della sospensione con una pipetta sterile e trasferirla in un bianco d'acqua deionizzata da 9 mL. Vortice completo, ed etichetta come "B".
  3. Ripetere questa fase di diluizione tre volte, ogni volta con 1 mL della sospensione precede

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Un campione di terreno di 10 g con un contenuto di umidità del 20% su base di peso secco viene analizzato per batteri coltivabili vitali tramite tecniche di diluizione e placcatura. Le diluizioni sono state effettuate come indicato nella Tabella 1. 1 mL di soluzione E viene versato su un mezzo appropriato e si traduce in 200 colonie batteriche.

Equation 1

Ma, per 10 g di terreno umido,

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Ci sono due applicazioni fondamentali di diluizione e placcatura dei batteri del suolo. La prima applicazione è l'enumerazione dei batteri coltivabili all'interno di un particolare terreno. La quantificazione del numero di batteri del suolo fornisce un'indicazione della salute del suolo. Ad esempio, se ci sono da 106 a 108 batteri coltivabili presenti per grammo di terreno, questo sarebbe considerato un numero sano. Un numero inferiore a 106 per grammo indica una salute del suolo più po..

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