Fonte: Laboratorio di Jeff Salacup - Università del Massachusetts Amherst
Il prodotto di un'estrazione con solvente organico, un estratto lipidico totale (TLE), è spesso una miscela complessa di centinaia, se non migliaia, di composti diversi. Il ricercatore è spesso interessato solo a una manciata di composti o, se interessato a molti, potrebbe aver bisogno di rimuovere i costituenti indesiderati che sono "in mezzo" o co-eluizione. Ad esempio, le concentrazioni di singoli composti in un campione sono spesso determinate su un gascromatografo accoppiato a un rivelatore ionizzante di fiamma (GC-FID), perché la relazione tra la risposta FID (in pA) e la quantità di composto in un campione(ad esempio,ng / μL) è sia lineare che sensibile. La porzione GC dello strumento separa diversi composti in un campione in base al loro punto di ebollizione, alla struttura chimica e all'affinità con una fase solida che può cambiare in base all'applicazione. Il risultato è un cromatogramma (Figure 1), che mostra la separazione dei diversi costituenti chimici nel tempo, nonché la loro concentrazione relativa (calcolata come l'area sotto la curva). Tuttavia, a volte più di un composto eluisce il GC alla volta (Figure 1). In questo caso, è necessaria la purificazione del campione prima che i composti possano essere quantificati con sicurezza.
Figura 1. Un cromatogramma che mostra la separazione di diversi costituenti chimici nel tempo e la loro concentrazione relativa (area sotto la curva). Vengono mostrati picchi co-eluinti e separati.
1. Impostazione e preparazione dei materiali
Questa purificazione produce un TLE privo di esteri che possono essere co-eluinti con gli alchenoni. Tuttavia, la purificazione ha prodotto acidi carbossilici, che non possono essere iniettati su strumenti comunemente usati per analizzare campioni per concentrazioni di alcheni a causa della loro bassa volatilità. Ad esempio, il punto di ebollizione dell'esano, un idrocarburo a 6 atomi di carbonio, è di 68 °C, ma il punto di ebollizione del suo acido (acido esanoico) è di 205 °C. La maggior parte dei biomarcatori suscettibili di GC hanno...
Come accennato in precedenza, la saponificazione è comunemente usata nei laboratori di geochimica organica per rimuovere gli esteri metilici degli acidi grassi (FAME) degli alchenoni, chiamati alchenoati, che co-eluiscono con gli alchenoni sui gascromatografi (Figure 1). La saponificazione viene anche utilizzata per "liberare" gli acidi grassi "legati" a sedimenti o macromolecole. La degradazione e la conservazione della materia organica e dei biomarcatori nei sedimenti comporta la rimozio.
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