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Purificazione di un estratto lipidico totale con la cromatografia su colonna

Overview

Fonte: Laboratorio di Jeff Salacup - Università del Massachusetts Amherst

Il prodotto di un'estrazione con solvente organico, un estratto lipidico totale (TLE), è spesso una miscela complessa di centinaia, se non migliaia, di composti diversi. Il ricercatore è spesso interessato solo a una manciata di composti. I composti di interesse possono appartenere a una delle diverse classi di composti, come alcani, chetoni, alcoli o acidi (Figura 1), e può essere utile rimuovere le classi di composti a cui non appartiene per avere una visione più chiara dei composti che ti interessano. Ad esempio, un TLE può contenere 1.000 composti, ma il proxy della temperatura superficiale del mare Uk'37 si basa solo su due composti (alchenoni) e il proxy della temperatura superficiale del mareTEX 86 si basa solo su quattro (tetraeteri di glicerolo dialchilglicerolo). Sarebbe opportuno che il ricercatore rimuovesse il maggior numero di composti a cui non sono interessati. Ciò rende l'analisi strumentale dei composti di interesse (alchenoni o GDCT) meno probabile che sia complicata da altri composti estranei.

In altri casi, una tecnica di purificazione a monte potrebbe aver prodotto composti che si desidera ora rimuovere dal campione, come la produzione di acidi carbossilici durante la saponificazione nel nostro video precedente. In entrambi i casi di cui sopra la tecnica di purificazione chiamata cromatografia a colonna è molto utile.

Figure 1
Figura 1. Gruppi funzionali geochimicamente importanti. Da Killops e Killops1.

Procedure

1. Impostazione e preparazione dei materiali

  1. Ottenere un estratto lipidico totale (TLE) utilizzando un metodo di estrazione con solvente (sonicazione, Soxhlet o estrazione con solvente accelerato (ASE)).
  2. Raccogliere quanto segue: pipette e bulbi di vetro borosilicato bruciato, gel di silice, esano, diclorometano (DCM) e metanolo.
    1. Questi materiali possono essere acquistati da qualsiasi rivenditore di prodotti chimici. I reagenti devono essere puri e privi di idrocarburi.

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Results

Questa tecnica di purificazione produce tre diverse fiale, ognuna contenente una diversa classe di composti o un gruppo di classi di composti. La complessità di qualsiasi campione da analizzare su uno strumento è stata notevolmente ridotta. Questo processo rimuove anche i composti, come gli acidi prodotti durante una saponificazione, che possono effettivamente aderire a parti degli strumenti, a causa della loro bassa volatilità, che ne ridurrebbe l'accuratezza, la precisione e la durat...

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Application and Summary

Gli alkenoni e i GDCT isoprenoidi sono entrambi costituenti molto comuni dei sedimenti marini e possono essere trovati in tutti gli oceani del mondo. Gli alchenoni vengono sempre più rilevati nei sedimenti lacustri, sebbene gli organismi responsabili della loro produzione siano diversi da quelli dell'oceano, e quindi la relazione tra il rapporto Uk'37 e la temperatura dell'acqua (calibrazione) è diversa dall'oceano e persino tra laghi separati. I GDCT isoprenoidi si trovano in alcuni grandi laghi ..

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References

Killops, S. and Killops, V. Introduction to Organic Geochemistry. Blackwell Publishing, Malden, MA (2005).

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Principles of Column Chromatography

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Silica Gel Column and Sample Preparation

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Silica Gel Column Chromatography

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