זיהוי בקטריופאג'ים בדגימות סביבתיות

מקור: מעבדות של ד"ר איאן פפר וד"ר צ'ארלס גרבה - אוניברסיטת אריזונה
מפגין מחבר: אלכס ווסימי

וירוסים הם קבוצה ייחודית של ישויות ביולוגיות המדביקות הן אורגניזמים אאוקריוטים והן אורגניזמים פרוקריוטים. הם טפילים מחייבים שאין להם יכולת מטבולית, וכדי לשכפל, להסתמך על חילוף החומרים המארח לייצר חלקים ויראליים כי הרכבה עצמית בתוך תאים מארחים.

וירוסים הם אולטרה מיקרוסקופיים – קטנים מכדי שניתן לצפותם במיקרוסקופ האור, הנראים רק ברזולוציה גדולה יותר של מיקרוסקופ האלקטרונים. חלקיק נגיפי מורכב מגנום חומצת גרעין, DNA או RNA, מוקף במעיל חלבון, המכונה קבסיד, המורכב מתת-units חלבון או קאפסומרים. בכמה וירוסים מורכבים יותר, capsid מוקף במעטפה שומנים נוספת, וחלקם יש נספחי משטח דמוי ספייק או זנבות.

וירוסים המדביקים את מערכת העיכול של בני אדם ובעלי חיים ידועים בשם וירוסים אנטריים. הם מופרשים בצואה וניתן לבודד אותם ממי שפכים מקומיים. וירוסים שמדביקים חיידקים ידועים בשם בקטריופאג'ים, ואלה שמדביקים חיידקים קוליפורמיים נקראיםקוליפג'ים (איור 1). הפאג'ים של חיידקי קוליפורם נמצאים בכל מקום בו נמצאים חיידקי קוליפורם.

איור 1. קוליפייג' טי-2.

להשיג מדגם של ביוב או מים המכילים קוליפייג '.
לדלל את המדגם 1: 10 ו 1: 100 באמצעות מאגר טריס. עשה זאת על-ידי העברת 1.0 מ"ל של תרבות ל- 9 מ"ל של חיץ טריס, ולאחר מכן ביצוע דילול כפול שני.
ממיסים שלושה צינורות של אגר רך (0.7% אגר או אגר סויה טריפטיאז לכל צינור 3 מ"ל) על ידי הצבתם באמבט אדים או אוטוקלבה.
מ...

דילול דגימת ביוב = 10^-1

מספר הלוחות שהושגו = 9

לכן, ריכוז פאג' בדגימת ביוב
= 10 x 9 ÷ 1 מ"ל
= 90 יחידות יוצרות פלאק / מ"ל

ביוב גולמי מכיל בדרך כלל 10³ - 10⁴ קוליפייג ' למ"ל, עם טווח של 10² – 10⁸ למ"ל.

ישנם יישומים פוטנציאליים רבים של coliphages כאינדיקטורים סביבתיים. אלה כוללים את השימוש בהם כאינדיקטורים לזיהום ביוב, יעילות הטיפול במים ושפכים, והישרדות של וירוסים וחיידקים אנטריים בסביבה. השימוש בבקטריופאג'ים כאינדיקטורים לנוכחותם והתנהגותם של חיידקים אנטריים ווירוסים מן החי תמיד היה אטר...

Transcript