JoVE Logo

Sign In

הפקת דנ"א קהילתי ממושבות חיידקים

Overview

מקור: מעבדות של ד"ר איאן פפר וד"ר צ'ארלס גרבה - אוניברסיטת אריזונה
הפגנה סופרת: לואיזה איקנר

שיטות ניתוח מסורתיות עבור קהילות מיקרוביות בתוך קרקעות כללו בדרך כלל בדיקות תרבותיות המשתמשות במתודולוגיית דילול ו ציפוי על מדיה סלקטיבית ודיפרנציאלית או בדיקות ספירה ישירות. ספירות ישירות מציעות מידע על המספר הכולל של החיידקים הקיימים, אך לא נותנות מידע על מספר האוכלוסיות הקיימות בקהילה או על מגווןן. ספירת הלוחות מאפשרת ספירה של אוכלוסיות תרבותיות או נבחרות מוחלטות, ולכן מספקות מידע על האוכלוסיות השונות הקיימות. עם זאת, מאז פחות מ 1% של חיידקי הקרקע הם culturable בקלות, מידע תרבותי מציע רק חלק מהתמונה. החלק האמיתי של הקהילה שניתן לתרבות תלוי במדיום שנבחר לספירה תרבותית. כל מדיום יחיד יבחר עבור האוכלוסיות המתאימות ביותר למדיום המסוים הזה.

בשנים האחרונות ניכרו היתרונות של חקר הדנ"א הקהילתי המופק מדגימות קרקע. גישה זו המבוססת על תרבות נחשבת לייצוגית יותר של הקהילה עצמה מאשר גישות המבוססות על תרבות. בנוסף למתן מידע על סוגי האוכלוסיות הקיימות, גישה זו יכולה גם לספק מידע על הפוטנציאל הגנטי שלהם. כמו בכל טכניקה, יש מגבלות על הנתונים שניתן להשיג עם מיצוי DNA. לכן, חוקרים רבים משתמשים כעת בהפקת DNA בשילוב עם ספירות ישירות ותרבותיות כדי למקסם את הנתונים המתקבלים מדגימה סביבתית.

Procedure

1. הפקת דנ"א של קהילת החיידקים

  1. כדי להתחיל את ההליך, לשקול 100 גרם של אדמה מסונת. הוסף את זה לכלי פוליפרופילן, ולהוסיף 100 מ"ל של חיץ החילוץ המורכב חיץ טריס מתוקן עם EDTA כדי לקדם את שחרור החיידקים מטריצת הקרקע, ולאחר מכן ללחוץ ביד.
  2. לאחר מכן, לשקול 100 גרם של חרוזי זכוכית, ולהוסיף אלה לכלי ער?...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Application and Summary

דנ"א קהילתי ממושבות בתרבית או המופק מהאדמה יכול להיות נתון לביואינפורמטיקה וגישות "אומיות" המאפשרות אפיון של החיידקים המקוריים בתוך הדגימה. הגישות האומיות כוללות מטגנומיקה – קביעה של "מי" נמצא בתוך הקהילה באמצעות רצף 16S rRNA. זה נותן הערכה של המגוון בתוך הקהילה.

ניתן לחשב גם א?...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tags
Bacterial Community DNA ExtractionMicrobial CommunitiesSoil BacteriaNon culture Based ApproachDNA Quality And QuantityBacterial DiversityFractionation MethodBlendingCentrifugationLysozymes

Skip to...

0:00

Overview

1:18

Principles of Bacterial Community DNA Extraction

3:48

Bacterial Community DNA Extraction

7:35

Applications

9:32

Summary

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved